[发明专利]一种熊胆粉滴眼液原液的提取方法

说明书

本发明公开了一种熊胆粉滴眼液原液的提取方法，包括如下工艺步骤：(1)取1重量份的熊胆粉，研磨成粉末；(2)制备熊胆粉水溶液；(3)熊胆粉醇沉步骤选择特定的混合温度和醇沉温度；(4)沉淀物洗涤；(5)合并上清液。本发明能够大幅去除了脂类蛋白等无效成分，保证提取液中主药成份牛磺熊去氧胆酸的含量和活性。

技术领域

本发明涉及分子生物分离领域，具体涉及一种熊胆粉滴眼液原液的提取方法。

背景技术

熊胆粉为黑熊引流胆汁的干燥粉末，其主要化学成分包括胆汁酸结合型牛磺熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、胆酸、去氧胆酸、微量胆色素及非胆汁酸类成分蛋白质、肽、微量游离氨基酸、胆固醇、脂肪酸和无机元素。

牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)，是由熊去氧胆酸(UDCA)的梭基与牛磺酸的氨基之间缩水而成的结合型胆汁酸。牛磺熊去氧胆酸是熊胆汁的有效成分，胆汁酸组合物具有较强的退热、抗菌、止痛镇痉作用，对革兰氏阳性菌有较强的抑制作用。工艺中去除过饱和脂质蛋白应是制剂关键目的，目前现有工艺中针对去脂提纯制备参数随意性较大，醇沉后洗涤技术不达标，制备过程控制不了蛋白变性等不利复杂因素，导致大规模生产用于产品纯度不高。

本发明为了解决现有工艺中蛋白分离技术的缺点，根据胆汁酸中生物分子对温度、浓度、时间的敏感特性，严格限定溶解、醇沉技术参数，达到提取具有生物活性的目的物质牛磺熊去氧胆酸。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明以熊胆粉为原料，提供一种制备工艺简单、分离效果优异的熊胆粉滴眼液原液提取方法。

一种熊胆粉滴眼液原液的提取方法，包括如下工艺步骤：

(1)取1重量份的熊胆粉，研磨成粉末；

(2)熊胆粉水溶液的制备：

另取5～6重量份注射用水，在21℃～25℃或40℃～50℃的温度下边搅拌边加入1重量份熊胆粉末，至完全溶解；

(3)熊胆粉醇沉步骤如下：

将步骤(2)溶液达到18℃～20℃边搅拌边加入，熊胆粉10～12重量份95％乙醇缓慢细流，搅匀，21℃～25℃静置24h，取上清液4℃备用；

或

将步骤(2)溶液降至4℃～6℃边搅拌边加入，熊胆粉10～12重量份95％乙醇缓慢细流，搅匀，4℃～6℃静置24h～48h，取上清液4℃备用；

(4)将步骤(3)剩余沉淀物，再添加10～12重量份95％乙醇洗涤，洗涤液在4℃～6℃的温度下放置2h～6h，取上清液；

(5)合并步骤(3)和(4)的上清液，回收至无醇味，即得。

优选地，步骤(2)中，1重量份的熊胆粉加入5重量份的乙醇。

优选地，步骤(4)中，醇沉残渣洗涤前温度降至20℃以下。

优选地，步骤(4)中静置时间为3-5h。

优选地，步骤(4)中洗涤液的静置温度为4℃。

与国家药品标准相比，本发明设定的溶解剂醇沉液浓度、温度、时间对熊胆粉提取原液进行熊胆粉杂质峰指纹图谱定性定量分析，大幅去除了脂类蛋白等无效成分，保证提取液中主药成份牛磺熊去氧胆酸的含量和活性。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1