[发明专利]荧光探针EuШ-dtpa-bis(adenine)及其在检测尿液中乳清酸中的应用

说明书

本发明公开了一种荧光探针Eu^Ш‑dtpa‑bis(adenine)及其在检测尿液中乳清酸中的应用。取二乙三胺五乙酸，乙酸酐，吡啶在65℃下搅拌回流24h。冷却，减压抽滤，洗涤，干燥。将得到的二乙三胺五乙酸二酐与三乙胺，二甲基甲酰胺(DMF)，腺嘌呤，于100℃搅拌回流24h。冷却，旋蒸，洗涤，干燥。得到的二乙三胺五乙酸‑双(腺嘌呤)与Eu(NO₃)₃·6H₂O于60℃加热搅拌2h，得到目标产物。将Eu^Ш‑dtpa‑bis(adenine)作为探针结合荧光方法检测乳清酸。本发明方法简单新颖，成本低，效率高，且可应用在实际尿样当中。

技术领域

本发明属于分析化学领域，尤其涉及一种新型荧光探针的合成和在真实尿液中检测乳清酸中的应用。

背景技术

乳清酸，也称为维生素B₁₃，在医疗领域有着广泛的应用。然而，在新出生的婴儿中，一种常染色体隐性遗传病-乳清酸尿症，偶尔出现。该病的患者由于两种重要的酶，乳清酸磷酸核糖转移酶和乳清酸核苷酸脱羧酶有缺陷而几乎不能合成嘧啶类核苷酸，从而使乳清酸不能转变为尿苷酸，导致乳清酸大量出现在血液和尿液中。健康人尿液中乳清酸含量约为 1～4mg/24h，而乳清酸尿症患者尿液中乳清酸含量高达400～1400mg/24h。所以患者在出生数月内就表现出明显症状，比如低色素巨成红细胞性贫血以及身体发育和智力发育障碍。所以医学上急需发展一种方法用来鉴别和定量分析乳清酸。

通常，检测乳清酸的常规方法有串联质谱法、毛细管区带电泳法、差分脉冲极谱法、气相色谱-质谱法和高效液相色谱法。这些方法通常被认为是快速且敏感的。但是这些方法通常前处理过程复杂，信号不稳定并且需要昂贵的仪器设备。对于一些偏远地区或欠发达地区，使用上述方法检测乳清酸是困难的。因此，迫切需要开发一种高选择性，高敏感性，方便且低成本的乳清酸检测方法。

发明内容

本发明的目的之一是设计合成一种可用于有效检测尿液中乳清酸的新型荧光探针Eu^III- dtpa-bis(adenine)。

本发明的目的之二是提供一种操作简单，成本低，敏感快速，且选择性好的检测乳清酸的方法。

本发明采用的技术方案是：本发明提供的荧光探针Eu^Ш-dtpa-bis(adenine)，其制备方法包括如下步骤：

1)将二乙三胺五乙酸、乙酸酐和吡啶混合均匀，在65℃下搅拌回流24h，冷却至室温，减压抽滤，依次用乙酸酐和无水乙醚洗涤，60℃下干燥，得二乙三胺五乙酸二酐(dtpaa)。优选的，按摩尔比，二乙三胺五乙酸：乙酸酐：吡啶＝1:4:6。

2)将二乙三胺五乙酸二酐、三乙胺、无水DMF和腺嘌呤混合均匀，在100℃下搅拌回流24h，冷却至室温，旋转蒸发，依次用乙腈和无水乙醚洗涤，减压抽滤，于50℃干燥，得二乙三胺五乙酸-双(腺嘌呤)。优选的，按摩尔比，二乙三胺五乙酸二酐：三乙胺：腺嘌呤＝1:3:2。

3)将二乙三胺五乙酸-双(腺嘌呤)和Eu(NO₃)₃·6H₂O分别加去离子水溶解，然后混合，于60℃搅拌加热2h，冷却，得Eu^Ш-dtpa-bis(adenine)。优选的，按摩尔比，二乙三胺五乙酸-双(腺嘌呤)：Eu(NO₃)₃·6H₂O＝1:1。

上述的荧光探针Eu^Ш-dtpa-bis(adenine)在定性和定量检测尿液中乳清酸中的应用。