[发明专利]一种提高单克隆抗体产量的方法及其应用

说明书

本发明提供了一种提高单克隆抗体产量的方法，包括如下步骤：(1)将杂交瘤细胞克隆化培养，将培养后的杂交瘤细胞注射入动物；(2)对动物开始喂服葡萄糖溶液；(3)采集腹水抗体；(4)纯化采集到的腹水抗体。本发明中在动物注射入杂交瘤细胞后对小鼠开始饲喂用纯水兑的葡萄糖溶液，得到了意想不到的技术效果，最后得到的单克隆抗体量大大增加，并且其效价与采用传统方法得到的单克隆抗体相当，大大的降低了抗体生产的成本，大大的增加了其经济效益，为IVD行业的原料的供给提供了一种新的思路。

技术领域

本发明涉及抗体的制备方法及其应用，具体涉及提高单克隆抗体产量的方法及其应用。

背景技术

单克隆抗体作为医药行业热门研究对象，广泛应用于各生物相关领域。在此环境下，以抗体为核心原料的免疫比浊、免疫层析、化学发光等技术平台也得到了长足发展。但是，其中应用的抗体原料存在产量不足、质量参差不齐的问题，成为了制约国产试剂质量的关键环节。所以，对于抗体产量的提高以及质量的控制就显得尤为重要。单克隆抗体的制备方法包括体外细胞培养法和动物体内诱生法，杂交瘤细胞的体外培养采用血清培养基和无血清培养基，其中基础培养基主要提供各种氨基酸、维生素和葡萄糖等各种前提物质，在血清培养基中的血清中含有上百种的蛋白质，这给单抗的纯化带来很大的麻烦，加之，血清来源有限，每批血清之间质量差异较大，直接影响结果的稳定性，同时血清的价格昂贵；而在无血清培养基中需要添加胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺和亚硒酸钠这四种成分，这才能起到类似血清的作用(血清中的激素可刺激细胞生长)，但是此种方法培养的杂交瘤细胞密度小，产量低，严重影响了单克隆抗体的生产。

目前，采用较多的单克隆抗体生产方法仍然为动物体内诱生法，即采用在小鼠体内注射分泌抗体的杂交瘤细胞，以腹水瘤的形式在其腹腔内增殖而得到单抗的腹水，在这其中如果通过某种方式提高腹水型单抗的产量，不仅可以减少抗体批间差异带来的试剂批间质量差异，减少后期的诊断结果的误差，还可以减少人力、物力资源的浪费。

众所周知，影响腹水型单抗产量的主要因素包括：1.致敏剂种类及使用方法；2.杂交瘤细胞数量、细胞株特性；3.小鼠种类、年龄、营养、个体差异；4.腹水采集方法等。目前，对于如何有效提高腹水型单克隆抗体产量的研究相对较少，迄今为止，只有极少量中文专利或文献报道过。其中，万晓春等人通过两次注射致敏剂，加强致敏效果，从而提高了小鼠腹水产量[CN201210572740.3，提高腹水型单抗产量的方法，万晓春,吕卫东,于广],胡玉敏等人通过在pristane(降植烷)致敏剂的基础上，加入弗氏不完全佐剂致敏，提高了小鼠腹水产量[胡玉敏,马泓冰,孙中文等，福氏不完全佐剂与pristane在腹水型单抗制备中的联合应用[J]，SUZHOU UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE 2003；23(6)]然而，上述方法都存在成本较高，工艺繁杂等问题，所以急需一种工艺简单，成本低的提高单克隆抗体产量的方法。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种工艺简单，成本低的制作单克隆抗体的工艺，其技术方案如下：

一种提高单克隆抗体产量的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将杂交瘤细胞进行筛选以及扩大培养，将筛选和扩大培养后的杂交瘤细胞注射入动物体内；

(2)先以纯水作为水源进行饲喂，饲喂3-7天后，对动物开始饲喂浓度为2-20％的葡萄糖溶液；

(3)采集动物腹水；

(4)纯化采集到的腹水，得到抗体。

进一步的，所述步骤(2)的具体操作为：先以纯水作为水源进行饲喂，饲喂3-7天后，每天1-3次，优选为2次，对动物开始饲喂浓度为2-20％的葡萄糖溶液。

进一步的，所述的以纯水作为水源进行饲喂的天数为5天。

进一步的，所述的葡萄糖浓度为5-10％。