[发明专利]一种H-FABP和cTnI二联高效检测试纸的制备方法

说明书

本发明公开了一种H‑FABP和cTnI二联高效检测试纸的制备方法，包括设在固定板上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；在硝酸纤维素膜上设有检测线抗体和质控线抗体；在金标垫上设有金标抗体，所述的样品垫为玻璃纤维棉制成的垫，所述的金标垫为羧化纤维素膜制成的垫，所述的金标抗体为显色抗体，检测线抗体为捕捉抗体，显色抗体与捕捉抗体为2株可互相配对形成夹心的抗人H‑FABP单克隆抗体，所述的金标抗体用40nm纳米金壳标记，所述金标垫上设有功能层，所述金标垫通过碳酸氢钠、牛血清白蛋白、酷蛋白以及聚氧烯月桂醚混合液浸泡。本发明通过特定功能层的金标垫和浸泡工艺，能够使得检测时样品之间避免相互干扰，能够大大提高检测精度。

技术领域

本发明属于生物技术应用领域，具体涉及一种心型脂肪酸结合蛋白H-FABP(Heart-typeFattyAcidBindingProtein，H-FABP)和心肌钙蛋白I(cardiactroponinI,cTnI)cTnI二联高效检测试纸。

背景技术

H-FABP存在于心肌细胞胞浆内，含量丰富。心肌受损早期，心肌细胞膜完整性被破坏，H-FABP进入血液。H-FABP在心肌受损后1-2h即可在血液中检测到。由于H-FABP心肌特异性高于目前临床常用的肌红蛋白，因此H-FABP可成为一种重要的检测急性心肌组织损伤的早期特异性标志物。目前，生化标志物的检测已广泛应用于急性心肌梗死、不稳定型心绞痛、急性心衰、心肌炎、心脏手术损伤评估、窒息新生儿心肌损伤等心肌损伤疾病的诊断、危险度分层和预后评判。美国每年因怀疑性冠状动脉综合征急诊就医病人达8000万，其中45％左右与心脏相关，15％诊断为急性冠脉综合征。我国急性冠状动脉综合征的发病率约50/10万，每年死于急性心肌梗死的人数超过100万。因此，H-FABP检测的应用具有重要的社会和经济效益。

当心肌细胞因缺血缺氧等因素遭破坏时，游离型cTnI和cTnT可首先迅速从细胞中释放入血，随后结合于心肌结构蛋白中的结合型cTnI和cTnT逐渐分解，缓慢释放入循环血中，从而解释了以心肌细胞受损为表现的疾病，如急性心肌梗死(AMI)，cTnI和cTnT在循环血中较早出现并能持续较长时间的原因。

所以H-FABP和cTnI对于心肌健康来讲是非常重要的健康指标参数。现有技术不能同时高效检测两种物质，检测时物质相互干扰，反而使金标垫的检测灵敏度降低。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种H-FABP和cTnI二联高效检测试纸，使其具有操作简便、灵敏度＜5ng/mL、结果稳定等优点。

发明内容：本发明提供了一种H-FABP和cTnI二联高效检测试纸，包括设在固定板上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；在硝酸纤维素膜上设有检测线抗体和质控线抗体；在金标垫上设有金标抗体，所述的样品垫为玻璃纤维棉制成的垫，所述的金标垫为羧化纤维素膜制成的垫，所述的金标抗体为显色抗体，检测线抗体为捕捉抗体，显色抗体与捕捉抗体为3株可互相配对形成夹心的抗人H-FABP和cTnI单克隆抗体所述的金标抗体用40nm纳米金壳标记，所述金标垫上设有功能层，所述金标垫通过碳酸氢钠、牛血清白蛋白、酷蛋白以及聚氧烯月桂醚混合液浸泡。

进一步地，所述功能层以质量分数计由18％纯硝酸银、70％明胶、8％的司本80以及4％的环糊精组成。

进一步地，所述金标垫由80％碳酸氢钠溶液、8％牛血清白蛋白、8％酷蛋白以及4％聚氧烯月桂醚混合液浸泡。

上述的H-FABP和cTnI二联高效检测试纸的制备方法，包括以下步骤：

(1)采用以柠檬酸三钠为稳定剂和还原剂，制备出单分散的银纳米颗粒作为牺牲模板，通过置换反应获得胶体级、高分散的40nm金纳米壳；

(2)调节纳米金壳溶液pH8.0～8.5，加入显色抗体与纳米金壳溶液反应，离心得沉淀，重悬沉淀，得金标抗体溶液；