[发明专利]sCD40L蛋白在制备早期诊断主动脉夹层试剂盒中的应用

说明书

本发明属于诊断试剂盒分子生物学领域，具体涉及sCD40L蛋白在制备早期诊断主动脉夹层试剂盒中的应用。该诊断试剂是以sCD40L蛋白作为标记物对其在血浆中的表达量进行检测，早期诊断主动脉夹层出现的风险，可迅速、有效的诊断主动脉夹层，且具有创伤小，简单易行的特点。

技术领域

本发明属于诊断试剂盒分子生物学领域，具体涉及sCD40L蛋白在制备早期诊断主动脉夹层试剂盒中的应用。

背景技术

主动脉夹层系一种病情凶险、死亡率极高的疾病，主动脉增强CT、核磁共振成像(MRI)等影像学检查为目前诊断主动脉夹层的主要方式，但以上方法存在诊断延迟、价格昂贵、操作复杂等缺点，且均为有创检查，目前诊断主动脉夹层尚缺乏特异性生物标志物。以往研究证实一些有望早期诊断主动脉夹层的生物学标志物，但其敏感性、特异性较差。因此，急需找到一些特异生物学标志物来快速诊断主动脉夹层。

CD40L是肿瘤坏死因子(TNF-α)家族的一种跨膜糖蛋白，主要表达于活化的CD4+T淋巴细胞和肥大细胞表面，提供B淋巴细胞活化所必需的协同刺激信号。另外它还表达于粥样斑块中的单核细胞、巨噬细胞、B细胞、内皮细胞和平滑肌细胞，可促进基质金属蛋白酶(MMPs)和氧自由基的释放。

既往研究认为sCD40L蛋白在动脉硬化的发生发展中起关键作用，而少有研究报道sCD40L蛋白与主动脉夹层的关系。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供sCD40L蛋白在主动脉夹层患者中的诊断价值，主要涉及sCD40L蛋白在主动脉夹层患者组织学及血浆学中的表达；本发明提供了sCD40L蛋白在制备早期诊断主动脉夹层试剂盒中的应用。

为了实现上述问题，本发明提供采用如下技术方案：

sCD40L蛋白在制备主动脉夹层早期诊断试剂盒的中的应用，该诊断试剂是以sCD40L蛋白作为标记物对其在血浆中的表达量进行检测，对主动脉夹层进行早期诊断。

该诊断试剂盒用包括：洗液、稀释液、标准液、CD40L抗体、辣根过氧化物酶标记链霉亲和素、TMB发光底物、终止液。

该诊断试剂盒主要是检测血浆中sCD40L蛋白的含量。

该诊断试剂盒的使用方法包括如下步骤：

步骤1、血浆的采集：研究对象入院后即刻抽取其静脉血，用含EDTA真空抗凝管收集血标本5ml。

步骤2、样本的处理：抽取静脉血10分钟内，抗凝管3000转/min离心处理10min，分离血浆，将处理好的血浆储藏于-80℃冰箱保存，用本发明检测试剂盒检测入选研究对象血浆sCD40L浓度；促凝管采集血标本即刻送本院检验科，检测其hs-CRP、D-二聚体浓度。

步骤3、ELISA方法检测血浆中sCD40L表达含量，以实验孔和副孔的平均值作为检测对象的测定值。

步骤4、数据的标准化处理：按照试剂盒说明书配制sCD40L标准品浓度，根据说明书要求按浓度梯度依次加入标准品，建立标准曲线。

步骤5、血浆标志物的检测：用乳胶免疫比浊法检测入选对象血浆hs-CRP浓度；用NycoCard法检测入选对象血浆D-二聚体浓度。

步骤6、主动脉夹层患者血浆中sCD40L的表达水平：结合主动脉造影结果，根据测得的血浆中的sCD40L、hs-CRP、D-二聚体的水平，观察其随时间变化，生物标志物的变化，并根据AUC曲线下面积判断更为准确的生物标志物。

步骤7、免疫组织化学检测sCD40L在主动脉夹层行主动脉置换术的患者主动脉组织及正常对照主动脉组织的表达。