[发明专利]一种广谱抑菌活性的多粘类芽孢杆菌DYr4.4及制备方法和应用

权利要求书

1.一种广谱抑菌活性的多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）DYr4.4，其特征在于：其保藏编号为CCTCC NO:M 2018023。

2.权利要求1所述的一种广谱抑菌活性的多粘类芽孢杆菌DYr4.4的制备方法，其步骤是：

A、无菌环境下挑取DYr4.4菌株单菌落，接种于装有25 mL最适培养液A：0.7％葡萄糖，0.02％硫酸镁，0.5％蛋白胨，0.3％牛肉膏，调节pH 值7.5-7.6的250 mL三角瓶中，放置在恒温培养振荡器中，调节温度为26- 30℃、转速为150 r/min，振荡培养22- 26h；

B、准备500ml三角瓶10个，每瓶装200 mL发酵液，每瓶按照1:100的比例加入上步制备的单菌落菌液，放置在大振幅恒温冷冻摇床中，26- 30℃下150 r/min振荡培养46- 50h；

C、配制350 L培养液：葡萄糖2.45kg、硫酸镁0.7 kg、蛋白胨2 kg、牛肉膏1.2 kg，将其依次加入500 L大罐中，封闭罐体，用100℃水蒸气对培养液加热至100℃消毒2- 3h，之后用冷水降温至26- 30℃，然后点燃酒精将接种口消毒，在酒精持续燃烧下倒入上步制备的2 L发酵液，并封紧接种口，连续发酵46- 50小时，温度手工控制在26-29℃；每两个小时通过玻璃观察发酵罐内的起泡情况，泡沫较多时用加压机将有机硅油加入发酵罐内消除泡沫；观察罐内的压强变化，控制发酵液充氧量, 根据发酵的程度，调控搅拌机的转速，从开始的16转到40转；

D、将发酵液过滤，在过滤后的发酵液中加入辅料轻质碳酸钙粉末，比例为3 kg/100 L发酵液；送入离心喷雾干燥塔内干燥，设置参数：干燥塔高温离心处温度为201℃，出口温度为78℃：每1 h收集一次干粉；干燥完毕后，收集干粉。

3.权利要求1所述的一种广谱抑菌活性的多粘类芽孢杆菌DYr4.4在制备治疗或预防梨树锈病药物中的应用，其步骤是：

A、施药时期：在每年的3-4月份，采用手动喷雾器或机动喷雾器，在晴天早晨9时前和下午4时后或多云天气，进行喷雾施药，均匀喷施叶片表面，每隔10天再喷施1次，连续喷施3次，喷施后24h遇到雨天气，天晴后应再补施一次；

B、用量：取多粘类芽孢杆菌菌株DYr4.4干粉，按照100-500倍浓度用水稀释，每亩地200-500 g；

C、叶片喷雾时候，与叶面肥和生长调节剂一起使用。