[发明专利]一种分离细胞的方法

说明书

本发明公布了一种分离纯化细胞的专用离心管、基质和方法。专用离心管由两端开口的离心管和两个离心管盖构成，离心管能够与离心管盖拧紧咬合形成密闭的空间。基质为一类物态（液态和固态）在4~95℃范围内随温度变化而变化的材料。分离细胞时，加热（或冷却）使基质液化后，将细胞混悬液加到基质表面或者与基质混匀，再经离心或自然沉降，使细胞通过基质（垫）分离后，有序分离富集到基质的特定空间位置上。改变温度使基质凝固以后，将液态基质分离后的细胞凝固支撑固定在分离完成时的空间位置上。拧下离心管两端的离心管盖，用活塞或气体加压原理推出含细胞层的基质端，切下目的细胞层。该方法能够简便、经济、高效地对细胞进行分离纯化。

技术领域

本发明属于细胞分离纯化领域，具体涉及一种分离纯化细胞的专用离心管、基质和方法，分离纯化后的细胞可用于细胞分析、鉴定、培养或临床病理诊断等方面。

背景技术

细胞分离纯化在细胞病理学诊断和细胞生物学研究中是一种必不可少的重要实验手段。

在临床获得的细胞学标本中，包括血液、浆膜腔积液、尿液、细针吸取细胞学标本等，目的细胞只是那些具有诊断价值的细胞，通常情况下，这些细胞细胞的数量少、含量低；血液中的循环肿瘤细胞（TCT）则更为稀少，而TCT在肿瘤的诊断、复发监测和预后判断中具有重要的价值。此外，有的细胞学标本中会含有许多不具有诊断价值的细胞和黏液、蛋白沉淀、细胞碎片等，这些成分会干扰目的细胞的分析检测和疾病的诊断。临床实践中，对目的细胞进行分离纯化以后进行检测分析，将提高诊断阳性率和分析检测结果的准确性。在细胞生物学的研究中，包括细胞培养、细胞代谢分析、基因表达和蛋白质合成研究、药物敏感实验等，通常也需要对细胞进行分离纯化后才能进行进一步的实验和检测。

目前，有多种方法进行细胞的分离纯化，包括密度梯度离心、流式细胞术、免疫磁珠、微流控芯片等方法，流式细胞术、免疫磁珠、微流控芯片等方法，一般需要经特异性的抗体识别细胞以后，借助复杂或昂贵的试剂、仪器设备，才能对细胞进行分离纯化；微流控芯片技术也可以根据细胞的大小、形状等性质分离细胞。显然，这些分离细胞的方法复杂或价格昂贵；有的方法分离后的细胞上带有捕获细胞时使用的材料，也限制了其应用。密度剃度离心法是一种较简单的方法，通过用特定密度的密度剃度分离液实现对细胞的分离纯化，但只有少数几种有明显密度差异的细胞能够通过该方法进行分离，如淋巴细胞。

在细胞病理学实践中，具有诊断价值的病变细胞主要是肿瘤细胞，其绝大多数具有细胞体积显著增大、核浆比增高的生物学特征。通过简便、高效地分离这些大细胞，能够提高肿瘤诊断的阳性率和准确性，并能为肿瘤的分子治疗靶点和预后判断指标检测提供良好材料。在正常细胞的发育过程中，也具有随着细胞发育成熟细胞体积发生明显变化的过程，不同种类细胞之间也具有细胞体积的差异，按照体积大小分离细胞也有重要的科学价值。

发明内容

本发明提供了一种细胞分离纯化的专用离心管、基质材料和方法。通过专用离心管和基质材料，实现对细胞的经济、简便的分离纯化。

一种分离纯化细胞的专用离心管，由离心管和两个离心管盖构成。离心管是两端开口的中空管，两端口径可以相同，或者上大下小。离心管两端的外表层带有外螺纹（卡扣）。离心管盖是密封型盖，底面为平面或凹面，底部可有密封圈（垫），内侧壁表层设有内螺纹（卡扣），能够与离心管两端拧紧咬合，防止液体渗出，形成密闭的空间。设计成一组内外径不相同的离心管，离心管内径从2~15mm，外径一般在不超过18mm。管壁厚度1~2mm。离心管由玻璃或透明塑料制成，瓶盖由透明塑料制成，便于对分离后细胞所处位置和基质情况进行观察。为了分离少量细胞，通常制成上端内径较大，下端内径较小的离心管，上段为内径较大的圆柱形中空管，下段为内径较小的圆柱形中空管，上下两段之间有一个平滑过度空间，这样易于加样混匀，并能将分离后的细胞富集在小的柱状空间，使收集细胞更加容易。