[发明专利]一种黑素细胞培养基质

说明书

本发明提供了一种黑素细胞培养基质，该培养基质可加快刺激黑素细胞增殖、分化及黑素形成。本发明在黑素细胞的基本培养液基础上添加了强抗炎能力的齐墩果酸，能够增强刺激黑素细胞，促进其增殖、分化及黑素形成。广泛适用于黑素细胞在内的多种细胞的原代和继代培养。

技术领域

发明涉及生物医药领域，特别涉及了一种黑素细胞培养基质。

背景技术

黑素细胞（ melanocyte， MC） 体外培养是研究黑素细胞增殖及黑素合成过程、揭示色素沉着异常及色素性疾病的病因、 病理生理等的重要手段。 黑素细胞体外培养的组织主要是人的表皮， 常采用负压吸引水疱法、包皮环切术等方式获取。取下的样本可单独或联合使用胰蛋白酶、 乙二胺四乙酸（ EDTA）等进行消化，获得黑素细胞悬液， 进行培养。

黑素细胞的基本培养液主要提供黑素细胞生长的最低需求， 包括改良 Eagle 培养基（ dulbecco modifedeagle medium， DMEM）、 Ham 培养液、 RPMI1640 培养液等。

齐墩果酸（Oleanolic acid，OA），五环三萜类化合物。齐墩果酸在临床上用于治疗黄疽 型肝炎、慢性迁延性肝炎及慢性活动性肝炎。

正常情况下， 体外培养的黑素细胞生长缓慢、 增殖能力弱， 因此需要在黑素细胞培养基中添加各种因子以刺激黑素细胞增殖、 分化及黑素形成。

发明内容

本发明提供了一种黑素细胞培养基质，该培养基质可加快刺激黑素细胞增殖、 分化及黑素形成。本发明在黑素细胞的基本培养液基础上添加了强抗炎能力的齐墩果酸，能够增强刺激黑素细胞，促进其增殖、 分化及黑素形成。广泛适用于黑素细胞在内的多种细胞的原代和继代培养。

技术方案如下：

本发明对比常规的黑素细胞培养基和添加齐墩果酸的培养基质，相同的培养条件培养原代黑素细胞。

1.皮肤样本

包皮环切术获得样本。

2.实验准备：

实验解剖器材(眼科剪，眼科镊，手术刀，200目细胞筛)高压灭菌121℃ 20min

25ml Hu16培养基的配制：

20ng/ml bFGF +10ng/ml CT+ 20μg/ml IBMX

+1*gentamicin

+10%FBS

+1*青链霉素溶液

+DMEM/F12

+OA

3.分散消化

用新的眼科剪和眼科镊将样本剪碎，约1mm3大小，分别移入含20ml 0.25%胰酶的2支50ml离心管中；置于37℃水浴锅中，消化20min。

4.培养

消化20min后，200目细胞筛过滤，滤液转移至新的50ml离心管中，750rpm离心5min，1500rpm离心5min，弃上清。

用0.01MPBS（含1%双抗）洗涤1次，1500rpm离心5min，弃上清

用完全培养基重悬细胞，接种于6孔板中，于37℃ 5%CO2 95%湿度培养箱中培养并观察。

培养3天后，加入OA的黑素细胞生长良好，触角明显；未加的黑素细胞数量稀少，未发现触角。