[发明专利]一种稳定、灵敏的四型胶原蛋白（IV-C）检测试剂

说明书

一种稳定、灵敏的四型胶原蛋白（IV‑C）检测试剂，包括试剂R1和R2。通过优化反应体系，采用TAPSO（3‑三羟甲基甲胺‑2‑羟基丙磺酸）缓冲液，并添加聚乙烯基吡硌烷酮、γ‑环糊精、黄原胶、NaCl、海藻糖、PEG6000、丙三醇等多种稳定剂，显著改善了试剂稳定性；采用羊抗人四型胶原蛋白抗体包被胶乳颗粒，检测时通过抗原抗体特异性免疫反应使相邻胶乳颗粒彼此交联，显著增强试剂的灵敏度和准确度。此外，优选的新型非离子表面活性剂RHEODOL TW‑O320V（三油酸聚氧乙烯山梨糖醇酐）和AMINON C‑11S（甲基椰油酸醇酰胺）联合使用，可以促进并维持抗体稳定，防止体系浑浊，进一步增强试剂的稳定性。

技术领域

本发明涉及四型胶原蛋白（IV-C）检测技术领域，特别涉及一种四型胶原蛋白（IV-C）检测试剂，还涉及使用此检测试剂的检测方法。

背景技术

四型胶原蛋白（IV-C）是构成基底膜的重要成分。正常肝内基底膜主要存在于血管、淋巴管、胆管周围，肝窦壁处缺乏。肝病发生时随炎症发展，纤维组织增生活跃，生成大量胶原沉积，各种胶原均有所增加，但其中最为重要的就是构成基底膜的Ⅳ型胶原的增加。目前认为，血清Ⅳ型胶原蛋白的浓度测定可作为检查肝纤维化的近代指标。

血清IV-C浓度与肝纤维化程度相关，是主要用于观察肝硬化的指标，可由血清IV-C浓度推测肝硬化的程度。急性肝炎时，虽然有大量肝细胞破坏，但因无明显结缔组织增生，故血清IV-C浓度与健康人无显著差异。慢性肝炎、肝硬化、肝癌病人，血清IV-C均明显增高，其增高程度依次为原发性肝癌、肝硬化、慢性活动性肝炎、慢性迁延肝炎、急性病毒性肝炎。因此，IV-C含量检测具有非常重要的临床意义。

目前，IV-C的检测方法有酶联免疫检测法( ELISA) 、放射免疫分析技术检测等。其中酶联免疫检测法( ELISA)需要特定设备，费时费力，不易推广使用；而放射免疫分析技术检测虽然灵敏度高，但设备昂贵，存在放射线辐射和污染等问题。

鉴于此，本发明采用胶乳增强免疫比浊法，通过优化反应体系，采用TAPSO（3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸）缓冲液，并添加聚乙烯基吡硌烷酮、γ-环糊精、黄原胶、NaCl、海藻糖、PEG6000、丙三醇等多种稳定剂，显著改善了试剂的稳定性；并且试剂中的羊抗人四型胶原蛋白抗体包被胶乳颗粒，在检测时可以通过抗原抗体的特异性免疫反应使相邻的胶乳颗粒彼此交联，显著增强试剂的灵敏度和准确度。此外，优选的新型非离子表面活性剂RHEODOL TW-O320V（三油酸聚氧乙烯山梨糖醇酐）和AMINON C-11S（甲基椰油酸醇酰胺）联合使用，可以促进并维持抗体稳定，防止体系浑浊，进一步增强试剂的稳定性。该试剂操作简便快速，适用于自动化分析，是一种更加稳定、灵敏的四型胶原蛋白（IV-C）试剂。

发明内容

本发明提供一种稳定、灵敏的四型胶原蛋白（IV-C）检测试剂，采用胶乳增强免疫比浊法，可以有效检测四型胶原蛋白的含量，具有灵敏度高，稳定性好等优点。

基本原理：

本发明采用胶乳增强免疫比浊法，将特异性抗体（羊抗人四型胶原蛋白抗体，IV-C）结合于胶乳颗粒表面，样本与胶乳颗粒在缓冲液中混合，样本中的IV-C与胶乳颗粒表面的抗体结合，使相邻的胶乳颗粒彼此交联，在570nm波长下检测溶液浊度变化，变化程度与样本中的IV-C含量成正比。

本发明是通过以下步骤得到的：

一种四型胶原蛋白检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：

1）试剂R1的组分为：

缓冲液_80mmol/L，

RHEODOL TW-O320V（三油酸聚氧乙烯山梨糖醇酐）_1g/L，