[发明专利]经改进的用于阴离子化合物的液相色谱法

说明书

本公开总体上涉及经改进的用于阴离子化合物的液相色谱法，其特别可与质谱联用。所述方法包括向携带样品的流动相中加入添加剂。流动相添加剂可有效改善所获得数据中靶标分析物的峰形，并/或消除或至少减少离子抑制。所述方法特别适合阴离子化合物，例如磷酸化化合物。

技术领域

本公开总体上涉及经改进的液相色谱法。具体而言，本公开涉及经改进的总体上使用液相色谱-质谱(LC-MS)系统用于分离和分析化合物的方法。所述方法特别适合阴离子化合物，例如磷酸化化合物。

背景技术

在液相色谱(LC)系统中，由一种或多种溶剂组成的流动相在高系统压力下被驱动通过分离单元，分离单元通常以色谱柱的形式提供。在高效LC(HPLC)系统和超高效LC(UHPLC)系统中，系统压力可高达例如约1200bar。所述柱含有固定相，其在LC中通常以颗粒(例如二氧化硅珠)的填充床的形式提供。颗粒被配制和/或官能化以分离样品中不同的分析物或组分(例如化学化合物)。当样品流经柱时，样品接触固定相。样品的不同组分对固定相具有不同的亲和力。这导致不同的组分在液体流经柱时彼此分离。结果，不同的组分在不同时间从柱出口洗脱。因此，来自柱的液体输出包含一系列带，每条带由样品的不同组分组成。也就是说，这些带分别由样品的不同组分组成，所述组分是通过柱彼此分离的。

流动相和其中携带的一系列带从柱出口流到检测器，所述检测器被配置为检测每条单独的带。作为一个例子，检测器可以包括液体流经的流动池、光源和光检测器，所述光检测器被配置为对流经流动池的液体进行基于光学的测量(例如吸光度)。然后，可以利用检测器产生的电信号来产生色谱图。通常，色谱图将信号强度标绘为保留时间的函数，或者标绘为保留体积的函数。数据曲线显示为与检测器所检测到的一系列单独的带相对应的一系列峰值。在分析色谱中，色谱图用于鉴定样品中的组分，并指示它们在样品中的相对浓度。或者，在制备色谱中，可利用柱的分离能力来纯化样品，例如从样品中所含的其他化合物中离析靶标化合物。

LC系统可以与质谱(MS)系统联用，从而形成混合型LC-MS系统。质谱(MS)系统通常包含用于离子化所研究样品的组分的离子源、基于气相离子不同的质荷比(或m/z比，或更简单的“质量”)分离气相离子的质量分析仪、用于对分离的离子进行计数的离子检测器、以及用于根据需要处理来自离子检测器的输出信号以产生用户可解释的质谱的电子器件。通常，质谱是指示检测到的离子的相对丰度(例如，离子信号强度，例如对于每个检测到离子的离子计数数)作为其m/z比的函数的一系列峰。在混合型LC-MS系统中，从LC柱洗脱的经分离的化合物被引入MS系统的离子源中。化合物在离子源中被离子化，所得到的离子被转移到质量分析仪中，并在分辨质量的基础上进行检测。因此，混合型LC-MS系统能够从样品获得三维(3D)LC-MS数据，其特征在于：洗脱时间(或采集时间或保留时间)、离子丰度和通过MS分选的m/z比。

历史上，利用有机溶剂和极性固定相(例如二氧化硅或氧化铝)进行LC。利用这种“正相色谱”，更多极性分析物结合到极性固定相上。这些分析物被柱保留，稍后洗脱。非极性分析物结合较弱，因此较早从柱中洗脱。从二十世纪八十年代开始，反相色谱(RPC)被广泛使用。在RPC中，使用水性溶剂或极性溶剂，并用疏水基团例如十八烷基链(C-18)官能化二氧化硅。在RPC中，洗脱顺序是相反的或颠倒的。非极性分析物将被非极性固定相保留较长时间，稍后洗脱。相反，极性较大的分析物不与官能化的二氧化硅结合，因此在极性流动相中较早洗脱。