[发明专利]甲型流感病毒哺乳动物细胞适应株及其制备和应用

说明书

本发明提供了一种甲型流感病毒哺乳动物细胞适应株及其制备和应用。具体地，本发明提供了一种甲型流感病毒H1N1型病毒的HA共有序列CH1(包括氨基酸序列和核苷酸序列)，以及相应的载体、表达细胞柱，以及基于该共有序列构建的重组病毒株。本发明还提供了包含所述共有序列和重组病毒株的疫苗组合物、制法和应用。

技术领域

本发明属于生物技术和免疫学领域；更具体地涉及一种甲型流感病毒哺乳动物细胞适应株及其制备和应用。

背景技术

流行性感冒(flu)是一种由流感病毒引起的呼吸道传染病。流感病毒每年都能在全球范围内造成严重感染和死亡病例。流感病毒分3个型——甲型、乙型和丙型，其中丙型流感病毒的病例数远远少于甲型和乙型，这也是只有甲型和乙型流感病毒被纳入每年的疫苗计划的原因。乙型流感病毒一般只感染人，在人群中小范围流行，致病力较弱,不会导致大流行。甲型流感病毒不仅能感染人，而且还能感染水禽、鸡、貂和猪等多种动物。另外，甲型流感病毒也是历史上导致大流行的病原体。甲型流感病毒根据其表面膜蛋白HA和NA的抗原特性又可以分为不同的亚型，其中HA有18个亚型，NA有11个亚型。在诸多亚型的流感病毒中，目前流行于人群的是H1N1和H3N2亚型的流感病毒。

预防流感最行之有效的方法是接种疫苗。现有的疫苗抵抗流感病毒的主要原理是其诱导产生的中和性抗体识别病毒HA蛋白头部结构域的受体结合区附近的区域。目前使用的疫苗有两种类型——灭活苗和减毒活疫苗。我国批准上市的是流感灭活苗。然而由于流感病毒突变较快，因此流感疫苗需要逐年根据当年的流行株更新，每年接种。这大大降低了流感疫苗的普及度，也造成了疫苗的生产滞后于疫情以及没有预见性等问题。为此，研发具有广谱保护效果的通用疫苗是流感疫苗的未来市场和方向。目前的通用疫苗以亚单位疫苗为主，如HA的茎秆区和M2e蛋白疫苗，以及DNA疫苗和载体疫苗等，这些亚单位疫苗由于只包含有限的病毒抗原，不能覆盖所有的全病毒抗原表位，其激活的免疫反应往往有一定的局限性，通常需要较强的佐剂辅助，在大动物水平上的免疫保护效果也难以保证。同时，这些新型疫苗都需要对流感疫苗现有的生产工艺和流水线进行更改，而且对于基因突变非常频繁的流感病毒来说亚单位疫苗的广谱保护效果还有待更多的验证。有一类通用疫苗是基于共有序列consensus sequence来设计疫苗抗原，但多是针对分离株有限而且基因序列变异不大的某个特定亚型的流感病毒比如H5N1，H7N9等设计抗原，在亚型内部达到通用效果。这些亚型的病毒由于在历史上感染人的病例不多，在亚型内HA，NA等基因序列的差异度也不是很大，因此较容易设计出能够与亚型内所有病毒株产生交叉保护的抗原。但目前主要流行于人群中的甲型流感病毒株是H1N1和H3N2亚型，也是现有流感疫苗的主要组分。由于H1N1和H3N2亚型的流感病毒在人群中流行时间长，地理范围广，亚型内的差异度非常大，目前尚没有报道一种广谱疫苗能对H1或者H3亚型内所有病毒株都产生交叉保护。

因此，本领域迫切需要开发针对这种长期流行于人群中、分离株众多的H1N1病毒的通用疫苗。

发明内容

本发明的目的在于提供新的甲型流感病毒哺乳动物细胞适应株及其制备和应用。

具体地，本发明的目的在于提供甲型流感病毒H1N1型通用型疫苗株的通用序列和获得方法。

在本发明的第一方面，提供了一种分离的流感病毒CH1多肽，该多肽选自下组：

(a)具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽；

(b)将SEQ ID NO:2氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有CH1免疫原性的由(a)衍生的衍生多肽。

在另一优选例中，所述的衍生多肽还具有血凝素功能。

在另一优选例中，所述的一个或多个指1-50个，较佳地1-20个，更佳地1-5，最佳地1、2、或3个。

在另一优选例中，所述多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。