[发明专利]一种单倍体胚胎干细胞的分选方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种单倍体胚胎干细胞的分选方法。本发明提供一种单倍体胚胎干细胞的分选方法，包括：将含有单倍体胚胎干细胞的悬浮液过滤，过滤介质的过滤孔径为4‑9μm，过滤压强≥0.1Pa。本发明发明人在研究中发现，利用单倍体胚胎干细胞和二倍化的细胞大小之间的差异，可以有效地对单倍体胚胎干细胞进行分选，此外，在过滤过程中，使过滤体系达到一定的过滤压强，不仅可以更高效地对单倍体胚胎干细胞进行分选，其分选获得的单倍体胚胎干细胞的增殖能力和单克隆形成能力也获得提升。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种单倍体胚胎干细胞的分选方法。

背景技术

单倍体胚胎干细胞(Haploid Embryonic Stem Cells,haESCs)通常指只含有一套染色体，但拥有类似于正常干细胞分裂分化能力的细胞群，因此在基因功能研究上具有重要作用。根据诱发方式不同，主要分为两种类型：孤雌单倍体胚胎干细胞(parthenogenetichaploid embryonic stem cells,PG-haESCs)和孤雄单倍体干细胞(androgenetichaploid embryonic stem cells,AG-haESCs)。由于单倍体细胞只具有一套染色体，有利于研究一些未知的隐性表型基因突变，因此它们在遗传分析、基因功能与性状研究中具有独特的优势，其应用前景非常广泛。

但是，由于单倍体胚胎干细胞存在自发的二倍化现象(例如，在传代和分化等过程中)，所以单倍体胚胎干细胞的单倍体性的维持对于单倍体胚胎干细胞的应用有着重要的意义。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种单倍体胚胎干细胞的分选方法，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供第一方面提供一种单倍体胚胎干细胞的分选方法，包括：将含有单倍体胚胎干细胞的悬浮液过滤，过滤介质的过滤孔径为4-9μm，过滤压强≥0.1Pa。

在本发明一些实施方式中，过滤介质的过滤孔径为4-9μm。

在本发明一些实施方式中，过滤介质的过滤孔径为4-8μm。

在本发明一些实施方式中，过滤介质的过滤孔径为4.5-7.5μm。

在本发明一些实施方式中，过滤压强≥0.5Pa。

在本发明一些实施方式中，过滤压强≥1Pa。

在本发明一些实施方式中，过滤压强≥3Pa。

在本发明一些实施方式中，过滤压强为3-25Pa。

在本发明一些实施方式中，所述过滤介质为微孔过滤膜。

在本发明一些实施方式中，所述微孔过滤膜的材质选自聚碳酸酯。

在本发明一些实施方式中，所述含有单倍体胚胎干细胞的悬浮液中，还含有单倍体胚胎干细胞所对应的二倍体细胞。

在本发明一些实施方式中，所述单倍体胚胎干细胞为孤雌单倍体胚胎干细胞和/或孤雄单倍体胚胎干细胞。

在本发明一些实施方式中，所述单倍体胚胎干细胞为哺乳动物单倍体胚胎干细胞。

在本发明一些实施方式中，所述悬浮液中细胞的总浓度为1×10⁷/ml-1×10⁴/ml。

在本发明一些实施方式中，所述悬浮液中细胞的总浓度为3×10⁶-1×10⁵/ml。

在本发明一些实施方式中，所述悬浮液中单倍体胚胎干细胞的含量≥1万/ml。

在本发明一些实施方式中，所述悬浮液中单倍体胚胎干细胞的含量≥25万/ml。