[发明专利]人VASN蛋白抗原表位、抗原模拟表位及其用途

说明书

本发明属于分子生物学、免疫学和细胞生物学领域，涉及人VASN蛋白抗原表位及其制备方法和用途。通过噬菌体筛选技术，获得两条抗原表位肽VP1和VP2，其与VASN蛋白430‑441位氨基酸序列具有高度同源性。进而，通过ELISA、竞争ELISA、Transwell、CCK‑8等试验，确定了表位肽VP1和VP2能够拮抗VASN抗体抑制肝癌细胞迁移和增殖的功能。因此，VASN(430‑441位)抗原表位及其抗原模拟表位在肿瘤抗体药物和肿瘤疫苗的研发中具有良好的应用前景。

技术领域：

本发明涉及蛋白质工程、分子生物学、免疫学及细胞生物学领域，具体而言，本发明涉及人VASN蛋白(Vasorin)抗原表位及其制备方法和用途。

背景技术：

人VASN蛋白(Vasorin)，又称Slit-Like2(SLITL2)蛋白，属于典型的I型跨膜糖蛋白，其胞外结构域经去整合素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloprotease 17，ADAM17)剪切、脱落，成为可溶性形式。人VASN蛋白在主动脉的血管平滑肌细胞有较高水平的表达，在肾脏、胎盘组织也有表达，其它组织则表达水平低[Ikeda Y，et al.(2004)PNAS101(29)：10732-10737]。而已有研究表明，乳腺癌细胞高表达VASN蛋白[J Malapeira，etal.(2010)Oncogene，30：1912-1922]。Westcott等人发现VASN等基因高表达，可以促进乳腺癌细胞的侵袭；进而利用基因芯片检测三阴乳腺癌患者肿瘤组织样品，结果显示，高表达VASN等基因的患者预后差[Westcott JM，et al.(2015)J Clin Invest 125(5)：1927-43]。Malapeira J等人研究结果显示，可溶性VASN(soluble VASN，sVASN)蛋白可以结合TGF-β，抑制其介导的上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition，EMT)[MalapeiraJ，et al.(2011)Oncogene 30(16)：1912-22]。Li等人研究表明，肝癌细胞、肝癌组织中异常高表达VASN；人肝细胞L02过表达VASN蛋白，能够促进其增值与迁移；敲低人肝癌细胞HepG2的VASN，则促进其凋亡、抑制其迁移[Li S，et al.(2015)Oncotarget 6(12)：10045-59]。此外，人肝癌细胞HepG2培养上清的外泌体中VASN蛋白水平明显高于正常肝细胞L02外泌体中的VASN。HepG2细胞来源的外泌体VASN蛋白可以转运至人脐静脉内皮细胞(HumanUmbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC)中，促进HUVEC细胞的迁移[Huang A，et al.(2015)Int J Biol Sci 11(8)：961-9]。上述研究结果提示，VASN可能通过促进肿瘤细胞生长和肿瘤血管形成，参与肿瘤的发生发展过程。

抗原表位作为激发特异性免疫应答的物质基础，对于免疫反应的相关研究具有重要意义。蛋白质间相互作用是通过其表面关键氨基酸残基组成的相互作用位点即功能结构域(domain)发生物理上的接触来实现的。这些关键位点的获得不仅可以加深对分子识别过程的认识，而且有利于深入了解信号传导通路的生物学机制，对合理化药物设计也具有重要价值。模拟表位(mimotope)，通常指能够模拟抗原表位的多肽结构，它具有与天然抗原相似的反应原性，与适当的载体偶联后，还可能具有相似的免疫原性，(但在天然抗原中可能并无与之相同或相似的序列)[Deroo S，et al.(2001)Comb Chem High ThroughputScreen 4(1)：75-110]。对于一些难以获得或尚不确定的抗原，人们很难甚至无法确定其抗原表位，而通过获得“模拟表位”，便有可能解决上述问题，尤其推动了构象型表位和非蛋白抗原表位的研究。“模拟表位”概念的出现，不仅为抗原表位的分析、疫苗研发开辟了一条新的思路，而且也为蛋白间相互作用研究提供了线索。