[发明专利]一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒及其定量检测方法

权利要求书

1.一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒，其特征在于，包括脂联素层析器、样本稀释液、洗涤液及胶体金标记脂联素抗体，所述脂联素层析器包括盒体、盒盖、吸水垫及硝酸纤维素膜，所述盒体具有一开口朝上的容置腔，所述吸水垫设置于所述容置腔内，所述硝酸纤维素膜设置于所述容置腔内且位于所述吸水垫的上方，所述盒盖盖设于所述盒体的开口端，所述盒盖开设有贯穿所述盒盖的上下表面的反应孔，以露出部分所述硝酸纤维素膜；其中，所述硝酸纤维素膜上包被有脂联素抗体。

2.如权利要求1所述的检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒，其特征在于，所述盒盖的下表面向下凸设有位于所述反应孔外缘的导流圈，所述导流圈自上而下呈渐缩设置。

3.如权利要求2所述的检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒，其特征在于，所述导流圈的上端缘的直径为0.6cm，所述导流圈的下端缘的直径为0.3cm。

4.如权利要求1所述的检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒，其特征在于，所述盒体的容置腔内设有安装槽，所述吸水垫与所述硝酸限位素膜均设置于所述安装槽内。

5.如权利要求1所述的检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒，其特征在于，所述盒盖的边缘向下延伸而形成周壁，所述周壁的内壁面沿周向设置有环形凸缘，所述盒体的外壁面凹陷形成与所述环形凸缘适配的环形卡槽。

6.如权利要求5所述的检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒，其特征在于，所述盒盖的上表面凹陷形成容置槽，所述容置槽环设于所述反应孔的外围。

7.如权利要求1所述的检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液为含有1％Triton-100的0.01mol/L磷酸盐缓冲液；所述洗涤液为含有0.7％牛血清白蛋白的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。

8.如权利要求1所述的检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒，其特征在于，所述胶体金标记脂联素抗体按如下步骤制备：

将质量分数为1％氯金酸与双蒸水按体积比1∶79配成A液；将质量分数为1％柠檬酸三钠、质量分数为1％鞣酸、25mM K₂CO₃与双蒸水按体积比4∶0.035～0.080∶0.035～0.080∶15.84～15.93配成B液；再将所述A液和所述B液在水浴内同时加热到59～61℃，搅拌A液，快速加入B液，继续搅拌1分钟，在10～13分钟内加热至沸腾，得到胶体金液；

利用0.25M K₂CO₃调整所述胶体金液的pH值为6.8～7.1；

将人血清白蛋白标记抗体原液在4℃下6000～13000r/min离心60分钟，吸取上清液；将所述上清液装入透析袋，用双蒸水透析去除盐分后，装瓶冷冻，得到脂联素抗体；

将0.27～0.30mg脂联素抗体缓慢加入100ml胶体金液中进行标记，搅拌15分钟后，依次加入10％迭氮钠500μl和1％牛血清白蛋白100μl，搅匀后在2.5～4.0℃，6000r/min条件下离心30分钟，去除上清液，沉淀物即为胶体金标记脂联素抗体。

9.一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒的定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

采集血样5～10ml，室温放置15min-120min，以3000r/min速度离心30min，吸取上清液至样本稀释液中混匀，即得待测样本；

利用移液器准确吸取25μL待测样本，滴加在脂联素层析器的反应孔内硝酸纤维素膜上；

待测样本完全渗入后，再向脂联素层析器的反应孔内硝酸纤维素膜上滴加25uL胶体金标记脂联素抗体；

待胶体金标记脂联素抗体完全渗入后，再向脂联素层析器的反应孔内硝酸纤维素膜上滴加25μL洗涤液；

待洗涤液完全渗入后，检测脂联素层析器的信号值，通过仪器结合定标卡信息计算待测样本的脂联素浓度，定量判定其质量浓度。