[发明专利]一种检测脂联素的荧光免疫层析试纸条及其定量检测方法

权利要求书

1.一种检测脂联素的荧光免疫层析试纸条，包括PVC衬板、硝酸纤维素膜、耦合物结合垫片、样本垫片及吸水垫片，其特征在于，所述PVC衬板上粘贴有硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜的一端粘贴有耦合物结合垫片，另一端粘贴有吸水垫片，所述耦合物结合垫片上粘贴有样本垫片；

所述硝酸纤维素膜上设置有测试带和控制带，所述测试带内包被有鼠抗脂联素抗体，所述控制带内包被有兔抗鼠抗体；所述耦合物结合垫片包被有荧光标记脂联素抗体。

2.如权利要求1所述的检测脂联素的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述检测脂联素的荧光免疫层析试纸条还包括壳体，所述壳体上设置有加样窗口和检测窗口，所述加样窗口位于所述样本垫片处，所述检测窗口位于所述测试带和所述控制带处。

3.如权利要求1所述的检测脂联素的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜按如下步骤制备：

分别将测试带抗体原液和控制带抗体原液在4℃下以6000～13000r/min速度离心60min，吸取两种上清液；

将两种上清液分别装入透析袋，用双蒸水透析去除盐分后，超滤浓缩后装瓶冷冻，得到测试带抗体和控制带抗体；

用pH值为6.5～6.7的磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液，得到0.8mg/ml测试带包被液和0.8mg/ml控制带包被液；

将所述测试带包被液和所述控制带包被液分别喷涂在硝酸纤维素膜对应的测试带和控制带位置，喷涂量为1μL/cm；

再将包被好硝酸纤维素膜置于37℃温度下烘干。

4.如权利要求3所述的检测脂联素的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液按重量计包括：Na₂HPO₄ 0.263-0.376份，KH₂PO₄ 1.000-1.109份，NaCl6份，KCl0.2份，蒸馏水1000份；

所述Tris缓冲液按重量计包括：三羟甲基氨基甲烷4.6-5.5份，KH₂PO₄2.0-3.0份，NaCl8份，KClO₄份，牛血清白蛋白9份，蒸馏水1200份。

5.如权利要求1所述的检测脂联素的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述耦合物结合垫片按如下步骤制备：

用pH值为6.4～6.6的MES溶液洗涤荧光微球，8000～15000r/min速度离心30min，去除上清液，重复操作两次；

用MES溶液重悬荧光微球，并加入活化剂，活化30min；

用pH值为6.4～6.6的MES溶液洗涤活化的荧光微球，8000～15000r/min速度离心30min，去除上清液，重复操作两次；

用pH值为8.5～9.5的硼酸溶液重悬活化的荧光微球，加入脂联素鼠单克隆抗体，室温下震荡混匀，8000～15000r/min速度离心30min，去除上清液；

用质量分数为5％的BSA溶液重悬活化的荧光微球，室温下震荡反应1h，8000～15000r/min速度离心30min，去除上清液；

用pH值为8.5～9.5的硼酸溶液重悬活化的荧光微球，8000～15000r/min速度离心30min，去除上清液，即得荧光标记脂联素抗体；

用PBS溶液将所述荧光标记脂联素抗体稀释10倍后，均匀地喷涂到耦合物结合垫片上，喷涂量为25μL/cm，于37℃温度下烘干即得包被有荧光标记脂联素抗体的耦合物结合垫片。

6.如权利要求5所述的检测脂联素的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球为羧基荧光微球，所述活化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；或者所述荧光微球为氨基微球，所述活化剂为N-羟基琥珀酰亚胺；或者所述活化剂为羟基微球，所述活化剂为BrCN。