[发明专利]一种通过蝾螈Oct4将人类血液细胞重编程为iPSC的方法有效
| 申请号： | 201810137319.7 | 申请日： | 2018-02-10 |
| 公开（公告）号： | CN108373998B | 公开（公告）日： | 2019-08-27 |
| 发明（设计）人： | 俞君英;张健;董成友;张颖 | 申请（专利权）人： | 安徽中盛溯源生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10 |
| 代理公司： | 合肥和瑞知识产权代理事务所(普通合伙) 34118 | 代理人： | 王挺 |
| 地址： | 230088 安徽省合肥市高*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转录因子 红细胞 重编程 祖细胞 细胞 多能干细胞诱导 人类血液细胞 游离型载体 培养基 诱导 多能干细胞 多能性基因 临床前研究 培养基培养 高效诱导 临床应用 饲养层 无外源 中间态 内源 激活 基因 | ||
1.一种通过蝾螈Oct4将人类血液细胞重编程为iPSC的方法，其特征在于，包括如下步骤，
S1、从人类血液细胞中抽提单核细胞，通过扩增培养基进行选择性培养，获取红细胞祖细胞；
S2、将包含蝾螈Oct4转录因子和其他转录因子的游离型载体导入S1中获取的红细胞祖细胞；
S3、将S2中获取的含有游离型载体的红细胞祖细胞经多能干细胞诱导培养基培养，在无饲养层体系中诱导成重编程中间态细胞；
S4、待完全诱导后，更换S3中所述的多能干细胞诱导培养基为多能干细胞培养基维持培养，获得蝾螈Oct4转录因子、其他转录因子表达消失且内源多能性基因POU5F1、NANOG、TRA-1-60与TRA-1-81表达激活的细胞，该细胞即为iPSC；
所述蝾螈Oct4转录因子表达产生的蛋白质所对应的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
所述其他转录因子选自NANOG、SOX2、LIN28A、KLF4、MYCL、MYCN、MYC、p53 knockdown、MIR302/367 cluster、ESRRB、REX1、GBX2、DLX4、ZSCAN10、ZSCAN4、TBX3、GLIS1、NR5A1/2、RARG、BMI1、KDM2B、TET1和SV40LT转录因子中的任意一种或者任意几种的组合。
2.根据权利要求1所述的一种通过蝾螈Oct4将人类血液细胞重编程为iPSC的方法，其特征在于，所述其他转录因子选自NANOG、SOX2、LIN28A、MYCL和SV40LT转录因子中的任意一种或者任意几种的组合。
3.根据权利要求2所述的一种通过蝾螈Oct4将人类血液细胞重编程为iPSC的方法，其特征在于，所述其他转录因子来源于人类。
4.根据权利要求1所述的一种通过蝾螈Oct4将人类血液细胞重编程为iPSC的方法，其特征在于，所述游离型载体包含DNA复制启动子和作用于此DNA复制启动子的反式作用因子。
5.根据权利要求4所述的一种通过蝾螈Oct4将人类血液细胞重编程为iPSC的方法，其特征在于，所述DNA复制启动子来源于EB病毒、Kaposi's肉瘤疱疹病毒、松鼠猴疱疹病毒、马立克式病毒的oriP。
6.根据权利要求5所述的一种通过蝾螈Oct4将人类血液细胞重编程为iPSC的方法，其特征在于，所述反式作用因子为一种EBV nuclear antigen 1。
7.根据权利要求1所述的一种通过蝾螈Oct4将人类血液细胞重编程为iPSC的方法，其特征在于，所述人类血液细胞来源于人外周血，脐带血和骨髓血中的任意一种。
8.根据权利要求1所述的一种通过蝾螈Oct4将人类血液细胞重编程为iPSC的方法，其特征在于，所述S1中的扩增培养基、S3中的多能干细胞诱导培养基和S4中的多能干细胞培养基均为化学成分明确的培养基。
9.一种如权利要求1-8中任一项所述通过蝾螈Oct4将人类血液细胞重编程为iPSC的方法，其特征在于，通过该方法获取的iPSC无外源基因成分，适用于细胞再生医疗的临床前研究和临床应用。
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