[发明专利]一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒

说明书

本发明公开了一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒，包括包被NGAL单克隆抗体的免疫磁珠、NGAL校准品溶液、铕标记的NGAL单克隆抗体溶液、清洗液和增强液。所述的包被NGAL免疫磁珠为带有官能团修饰的直径1~3μm的超顺磁珠与NGAL单克隆抗体共价偶联物。本发明的灵敏度高，NGAL的灵敏度为1ng/mL，血清(浆)、尿液样本不需要稀释；检测时间短，30min出报告；样品需求量少，一次上样只需50μL；配套全自动时间分辨免疫分析仪，操作简单，无人为误差并节省人力。

技术领域

本发明涉及体外试剂检测技术领域，具体地说，本发明涉及一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒。

背景技术

急性肾损伤(Acute Kidney Injury，AKI)是由各种原因引起的肾功能在短时间(几小时至几天)内突然下降而出现的临床综合症。AKI临床多发且病死率较高，流行病学调查表明在总住院病人中的发病率为5％～7％，而在重症监护病房病人中发病率为25％，其中病死率约为50％～80％。因此尽早诊断AKI已成为肾病治疗的一个关键因素。但缺乏特异性的早期临床诊断指标，是治疗该病的主要障碍。

中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(Neutrophil Gelatinase-associatedLipocalin，NGAL)是脂质运载蛋白lipocalin超家族的2号成员，相对分子质量为25kD，由人类中性粒细胞分泌。缺血性或肾毒性肾损伤时，NGAL由肾脏大量表达，并被释放到尿液和血浆。NGAL含量在损伤发生后2小时内升高，使之成为早期且敏感的肾损伤生物标志物。

目前检测NGAL的方法主要有荧光免疫层析法、胶乳增强免疫比浊法、化学发光法。荧光免疫层析法和胶乳增强免疫比浊法虽然操作简单、检测时间短，但其存在检测灵敏度低、准确度较差、重复性差等缺点；化学发光法虽然具有灵敏度和准确度高、线性范围宽等优点，但是存在仪器设备昂贵、检测时间长等缺点，不适合基层社区医院使用。因此，我们需要更快提供准确结果的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中存在的上述问题，提出了一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒。本发明将时间分辨荧光免疫分析技术与磁微粒相结合，提供了一种成本低廉、操作简单、准确、灵敏度高、检测范围宽的，基于磁微粒的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，能够定量检测样品中NGAL含量，检测结果更加准确可靠，具有更高的检测灵敏度和特异性，并达到了较佳的性能参数。本发明的试剂盒将大大提高AKI的诊断率，在AKI早期诊断、疗效观察和预后判断中发挥越来越重要的作用。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒，包括包被NGAL单克隆抗体的免疫磁珠、NGAL校准品溶液、铕标记的NGAL单克隆抗体溶液、清洗液和增强液。

在上述磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒中，所述的包被NGAL免疫磁珠为带有官能团修饰的直径1～3μm的超顺磁珠与NGAL单克隆抗体共价偶联物，其中所使用的磁珠为羧基磁珠、氨基磁珠、羟基磁珠、甲苯磺酰基磁珠、NHS磁珠、链酶亲和素磁珠、蛋白A磁珠、蛋白G磁珠、抗小鼠IgG磁珠、亲水磁珠、疏水磁珠中的一种或几种。

在上述磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒中，所述的单克隆抗体为针对NGAL不同表位的抗体。