[发明专利]一种模拟坏死肿瘤细胞的磷酸钙-脂质纳米疫苗及其应用

说明书

本发明属于疫苗领域，涉及一种仿生的纳米疫苗制剂，具体涉及一种模拟坏死肿瘤细胞的磷酸钙‑脂质纳米疫苗及其应用。所述疫苗内层的磷酸钙是高效包载寡聚核苷酸类物质的疏水性纳米颗粒；外层脂质结构是高度模拟细胞膜流动性的材料，能负载天然的细胞膜蛋白和HSP70活性肽段。本纳米疫苗制剂能克服传统肿瘤疫苗的诸多局限，其核心优势在于高度的整合能力，将3种活性成分天然的多价肿瘤细胞膜抗原蛋白(CM)，α螺旋修饰的热休克蛋白HSP70活性肽段(αHSP70p)，佐剂寡聚核苷酸(CpG)包载入磷酸钙纳米粒(CaP)，同时递送至抗原提呈细胞，从而激活固有免疫与适应性免疫。具有较高潜在应用价值与临床转化前景。

技术领域

本发明属于疫苗领域，涉及一种仿生的纳米疫苗制剂，具体涉及一种具有核壳结构的磷酸钙-脂质纳米颗粒，尤其是一种模拟坏死肿瘤细胞的磷酸钙-脂质纳米疫苗及其应用。所述疫苗内层的磷酸钙是能够高效包载寡聚核苷酸类物质的疏水性纳米颗粒；外层的脂质结构是高度模拟细胞膜流动性的材料，能够负载天然的细胞膜蛋白和HSP70活性肽段。

背景技术

资料显示，恶性肿瘤是威胁人类健康的头号杀手，常规的治疗手段包括手术治疗、放射治疗、化学治疗，但实践显示所属的治疗方案均效果有限，其根本原因在于无法抑制肿瘤在体内的转移和复发，同时在治疗过程中具有多种毒副作用。有研究报道了免疫治疗作为一种新型的抗肿瘤治疗方式，能够刺激机体自身的免疫系统实现对肿瘤细胞的有效清除，为恶性肿瘤的治疗带来了新的希望。2011年以来，肿瘤的免疫治疗经过了一个快速发展的阶段，2013年Science杂志也将肿瘤的免疫疗法列为科技十大突破，免疫检查点抑制剂PD/PDL-1抗体针对恶性黑色素瘤的效果亦取得了令人瞩目的效果，显著提高了患者的生存时间；然而，免疫检查点抑制剂疗法面临了治疗响应率低的问题，其中很大部分原因是肿瘤微环境中肿瘤突变负荷不足导致的免疫细胞的浸润偏少，因此，借助于其他方式来构建新的综合治疗手段对于提高检查点阻断治疗的临床效果显得尤为重要。

肿瘤疫苗是目前检查点阻断治疗的协同治疗的首选方案。肿瘤疫苗通过直接刺激树突状免疫细胞，能够潜在地活化外周的CD4+/CD8+的T细胞等在肿瘤部位的浸润，从而在上游激活潜在的人体的免疫功能。理想状态下，疫苗激起的CD8+T细胞具有很好的活性，能够识别肿瘤细胞上的多肽-MHCⅠ类抗原肽复合物，针对肿瘤细胞的特异性标志物有更好的识别。但其设计是非常挑战的工作，包括三方面需要考虑的因素：(1)选择合适的肿瘤相关抗原，旨在引起特异性T细胞的应答；(2)选择一种合适的免疫刺激佐剂，旨在激活模式识别受体来增强固有免疫；(3)同时将抗原与佐剂高效递送进入同一个树突状细胞中。实践显示，单一抗原成分的肿瘤疫苗最容易实现临床转化，已有许多正在进行的临床试验，但因为肿瘤的高度异质性和免疫抵抗的影响，尚未实现突破；近年来研制的个性化肿瘤疫苗更多的关注肿瘤异质性和抗原的差异性，取得了一些良好的效果，例如Ott,P.A.等通过计算机算法及实验室高通量测序，筛选出了病人自身的20种新生抗原，以此制备的20种多肽及佐剂的混合物激发了病人强有力的免疫反应，初步证明了基于癌症的个性化肿瘤疫苗可行性；但该方法面临一些缺陷，例如制备过程比较繁琐，游离混合物成分入胞效率较低等。虽然肿瘤裂解物体外刺激树突状细胞肿瘤疫苗Provenge已经被批准用于前列腺癌的治疗，但是受限于肿瘤裂解物中复杂的成分以及免疫耐受问题，效果仍旧有待改进，所以肿瘤疫苗的研发是一个亟待解决的问题。