[发明专利]一种促进马铃薯晚疫病菌产生大量孢子囊的方法

说明书

本发明提供了一种促进马铃薯晚疫病菌产生大量孢子囊的方法，属卵菌领域，该方法具体包括：菌株的选择、培养容器的选择、培养基的选择和接种及培养，其中，培养瓶的体积为240～500mL，且培养瓶具有可透气瓶盖。本发明在利用培养基培养晚疫病菌株的基础上，将传统培养皿改用为空间更大且有一定透气效果的培养瓶来作为培养容器，用此方法可有效解决以往马铃薯晚疫病菌培养中产孢子囊数量少的问题。本发明相对传统培养皿中培养菌株产生孢子囊数量有显著提升，为马铃薯晚疫病的研究提供保障，且该方法成本低、操作简单，降低了悬浮细胞系污染的风险，是一种高效、快速的新方法，也为利用马铃薯晚疫病菌作为实验材料的相关研究提供了一个平台。

技术领域

本发明涉及一种促进马铃薯晚疫病菌产生大量孢子囊的方法，属卵菌领域。

技术背景

马铃薯晚疫病由卵菌纲致病疫霉(Phytophthora infestans(Mont.)de Bary)引起，是马铃薯的毁灭性病害之一，一般年份可导致减产10％～20％，发病重的年份可减产50％～70％，甚至绝收。

为防治马铃薯晚疫病病害，科学家们进行了大量的研究，研究表明马铃薯晚疫病菌株产生的孢子囊是马铃薯晚疫病病害循环的关键所在，因此要针对该病害进行更深入的研究，提取疫霉菌孢子囊是必要的工作之一。然而在实验中人为培养晚疫病菌的产孢数量并不理想，尤其在长期多代培育之后，培养产生的孢子囊数量很难满足实验的需求，对研究形成了瓶颈。为确保实验的正常进行，改良产孢方法增加产孢量是首要任务。

各类菌种的培养一般使用培养皿，培养皿用皿盖盖好并用封口膜封口为常见的防污染操作，但是由于结构的缘故，空气无法流通，因此对于好氧型微生物的培养造成了一定的阻碍。而培养瓶一般用于细胞和组织的体外培养，其优势在于瓶内空间大、瓶盖可透气和防污染能力强。

发明内容

针对现有的培养皿培养马铃薯晚疫病菌产生孢子量不足，本发明提出了一种促进马铃薯晚疫病菌产生大量孢子囊的方法，该方法结合培养瓶的空气容量大及空气可流通的优势和培养皿用于培养菌种的用途，使马铃薯晚疫病菌产孢数量显著增加，为马铃薯晚疫病的研究提供保障。

本发明的技术方案如下：一种促进马铃薯晚疫病菌产生大量孢子囊的方法，其具体的方法包括如下步骤：

a.菌株的选择：选择马铃薯晚疫病菌株，编号为XH05-5-4，在20℃培养箱中培养10～15天备用；

b.培养容器的选择：选择瓶盖可透气的培养瓶，其中，培养瓶瓶盖带滤膜，滤膜可透气；

c.培养基的选择：选择黑麦-番茄汁培养基；

d.接种及培养：在无菌条件下，在b步骤所述的培养瓶中加入c步骤所述的培养基，采用打孔器打下目标菌块接种于培养基中央；盖好培养瓶瓶盖放入20℃培养箱中黑暗培养12～15天，即得大量的马铃薯晚疫病菌孢子囊。

进一步地，所述的培养瓶体积为240～500mL。

进一步地，所述培养基的制备方法为：称取50～60克黑麦，用蒸馏水浸泡24小时，直到大部分黑麦都发芽露白，加热煮沸，至麦囊破裂，过滤，量取900毫升，加入番茄果汁100毫升及琼脂15克摇匀，放入高压灭菌中灭菌30分钟，即完成黑麦-番茄汁培养基的制备。

本发明的特点为：一般的培养皿培养菌种时用培养皿盖盖好再用封口膜封好以减少空气的污染，本发明通过使用培养瓶代替培养皿来培养马铃薯晚疫病菌，所述的培养瓶瓶盖带滤膜，滤膜可透气，该种瓶盖可增加培养瓶中空气交流，同时瓶盖所带的滤膜在透气的同时有效阻断空气中的污染物对菌株的影响，促进菌种的大量产孢。