[发明专利]一种马齿苋愈伤组织诱导及悬浮培养的方法

说明书

本发明公开了一种马齿苋愈伤组织诱导及悬浮培养的方法。所述的愈伤组织诱导的方法包括以下步骤：1、种子表面消毒；2、种子萌发和愈伤组织的诱导；3、愈伤组织的继代培养。此外，本发明还提出了一种马齿苋细胞的悬浮培养方法，包括：将所述的愈伤组织转入液体培养基中，在摇床转速为100rpm，25℃避光下培养，获得马齿苋悬浮细胞。本发明选用了毒秀定(picloram)作为马齿苋愈伤组织诱导、继代及悬浮培养的诱导剂，同时外植体选用表面消毒的种子直接在诱导培养上进行萌发和愈伤组织的诱导，诱导效率为100％。从愈伤组织的诱导、继代和悬浮细胞培养都选用同一个浓度的毒秀定来进行诱导，方法简单，不需要对外植体进行多次操作，同时避免了褐化现象的发生。

技术领域

本发明涉及一种植物组织培养方法，特别涉及一种马齿苋愈伤组织诱导及悬浮培养的方法。本发明属于植物组织培养技术领域。

背景技术

马齿苋，别名马齿菜、瓜子菜、马蛇子菜、五行草、长寿草、长命苋等，主要分布于温带及热带地区。在我国马齿苋有6个品种：马齿苋、毛马齿苋、大花马齿苋、四瓣马齿苋、沙生马齿苋和小琉球马齿苋。马齿苋主要作为野生蔬菜使用，以野生为主，很少有人工栽培。

马齿苋营养价值很高，富含钙、磷、铁、胡萝卜素、硫胺素、尼克酸、抗坏血酸、苹果酸、柠檬酸、香豆素和黄酮等。马齿苋中富含ω-3脂肪酸可增加血管中前列腺素的合成，减少血栓素A2，降低血液粘度，还能抑制胆固醇和甘油三酯的合成，防止动脉粥样硬化，预防心血管疾病的发生。马齿苋含有高浓度的L-去甲肾上腺素，能促进胰岛素的分泌，具有降低和稳定血糖的作用。马齿苋多糖POP可增加T淋巴细胞数量，抑制肝癌细胞的增殖，同时富含天然抗氧化剂具有很强的清除自由基的能力，可降低其他致癌物质诱发癌变的概率，还能延缓皮肤和机体的衰老。马齿苋提取物对痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、黄曲霉、赤霉菌等具有很好的抑制作用。

马齿苋种类繁多，资源丰富具有很高的利用价值和广阔的开发价值。但是目前对它的利用开发还不够深入和全面，同时其生长环境被工业污水所污染，单靠野生资源供给马齿苋将会面临大多数中草药所处的现状（如甘草等中草药野生资源满足不了人们对其的需求，而人工品种品质不高）。植物细胞工程培养技术具有可延续、可控制悬浮细胞的生长周期，可放大进行工业化生产等优势，是解决马齿苋将来出现野生资源供给满足不了人们对它需求的解决途径之一，也是研究开发利用马齿苋的一种方法和工具。

目前对马齿苋在组织培养进行了一些研究和报道，主要通过将无菌苗或者野生马齿苋的茎和叶等，经不同配比的植物激素6-BA、2,4-D或NAA诱导产生愈伤组织。虽然，通过不同激素浓度的组合可成功诱导马齿苋愈伤组织，但是在诱导过程中需要摸索和调整激素的比例，其次在进行愈伤组织继代过程中还需要再次对植物激素比例进行摸索和调整。在进行马齿苋愈伤组织诱导、继代和悬浮培养中，需要对植物激素种类和浓度比例进行多次变换，易导致添加激素错误的问题，而且多次添加易导致操作环节出现污染的问题。

发明内容

本发明的目的之一是提供了一种简单诱导马齿苋愈伤组织的方法。

本发明的目的之二是提供了一种马齿苋细胞的悬浮培养方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明的一种马齿苋愈伤组织的诱导方法，包括以下步骤：

步骤一：将马齿苋种子用84消毒液进行表面消毒10~15 min，期间放置于旋转摇床进行充分混合，在超净工作台中用无菌水对消毒后的种子进行洗涤5次以上，作为外植体备用；

步骤二：表面消毒后的马齿苋种子转移到愈伤组织诱导培养基上进行种子萌发和愈伤组织的诱导，培养条件为长日照，温度为25℃；经过7~10天，马齿苋种子萌发，并且茎叶部位的组织开始被诱导产生愈伤组织；