[发明专利]一种核糖核酸提取用无机材料滤芯的高效纯化柱

说明书

本发明公开了一种核糖核酸提取用无机材料滤芯的高效纯化柱，其特征在于该纯化柱的滤芯采用平均直径小于2μm的无机纤维制成。本发明提供的这种核糖核酸提取用无机材料滤芯的高效纯化柱，其相比目前采用有机材料作为滤芯的纯化柱，内部滤芯对于核糖核酸具有更高的吸附效果。根据人体血清miRNA提取实验的qPCR检测实验结果，本发明的纯化效果相比国产纯化柱提高10倍左右，而相比某进口纯化柱提高4倍左右，进一步提升了已有核糖核酸纯化柱的纯化品质。

技术领域

本发明涉及一种核糖核酸提取用无机材料滤芯的高效纯化柱。

背景技术

核糖核酸纯化柱(Spin column)是目前公知的用于各种材料的RNA提取以及精制的核心装置。其具有操作简单、回收率高、性能稳定等特点，目前这种产品已经为国内外大多数实验室和公司使用。

已知的纯化柱的滤芯主要采用硅胶膜、硅基质膜或者硝化纤维等有机材料作为核糖核酸的特异性吸附材料，这类材料对其他生物材料基本不吸附，可以保障最大程度地回收样品中的DNA\RNA，同时去除其他杂质。

众所周知，分子生物学研究中MicroRNA(miRNA)是由内源基因编码、长度约21～25nt的一类非编码单链RNA分子，其主要功能是参与动植物转录后的基因表达与调控。提取纯化RNA是一个基础性的工作，各种临床检测或者基础科研中都需要提取纯化RNA。在核酸样本中低丰度的核酸检测中，纯化效率高则低丰度的核酸能获得更多，便于下游检测”等以突出该纯化柱的优势。

目前国内外提取纯化RNA的方法中较为常见的一种为Trizol法。以提取正常人体血清microRNA为例，其流程通常为先取一定量的血清样品，加入Trizol裂解液和氯仿，离心取上清液，把上清液与乙醇混一起，上纯化柱提取，最后采用无RNase水(无RNA酶的水)洗脱。

由于不同滤芯材料的纯化柱对于RNA的提取效果是不同的，因此对于提取后的RNA含量的后续检测也是评定纯化柱对于核酸吸附效果的重要环节。通常情况下，如果纯化柱的提取效果好则提取的总RNA含量高，那么在其中miRNA含量相对也高。当然现有技术中主要采取qPCR检测法，即实时PCR检测法专门检测个别miRNA的含量，如果含量高，则对应的Ct值小，说明纯化柱的提取效果好(提取物纯度高)；如果含量低，则对应的Ct值大，说明纯化柱提取效果差(提取物纯度低)，对于目前的纯化柱来说，在相同的提取方法及操作条件下，最后能通过Ct的大小判断核酸纯化柱，或者说核酸纯化柱的滤芯的提取吸附效果。当然，RNA要进行PCR检测，必须将RNA先转换为DNA，所以在PCR检测环节中，RNA提取之后需要通过逆转录反应将RNA转换为DNA后再进行PCR检测。

根据我们了解的情况并通过长期实践，目前以有机材料作为滤芯的纯化柱在提取效果上(miRNA含量)的提升有限，提取含量低于预期。这主要归结为现有纯化柱中滤芯材料的性能，因此为了提取得到纯度更高，量更大的核糖核酸，必须寻找更好的纯化柱滤芯替代材料。

发明内容

本发明目的是：提供一种核糖核酸提取用无机材料滤芯的高效纯化柱，其相比目前采用有机材料作为滤芯的纯化柱，提取效果更好。

本发明的技术方案是：一种核糖核酸提取用无机材料滤芯的高效纯化柱，其特征在于该纯化柱的滤芯采用平均直径小于2μm的无机纤维制成。

进一步的，本发明中所述无机纤维选用下述单一或几种物质的混合物：氧化铝纤维、硅酸铝纤维及玻璃纤维。

更进一步的，本发明中所述玻璃纤维是指C-玻璃纤维，D-玻璃纤维，E-玻璃纤维和AR玻璃纤维中的一种或几种的混合物。

进一步的，本发明中所述氧化铝纤维的组分质量百分比含量为：Al₂O₃ 65～99％，SiO₂ 1～35％。