[发明专利]溴酚蓝在作为检测牛胰岛素淀粉样纤维探针和作为牛胰岛素淀粉样纤维抑制剂方面的应用

说明书

溴酚蓝在作为检测牛胰岛素淀粉样纤维探针和作为牛胰岛素淀粉样纤维抑制剂方面的应用，属于生物医学技术领域。荧光光谱图显示溴酚蓝加到牛胰岛素淀粉样纤维溶液后，荧光强度是牛胰岛素溶液与溴酚蓝混合后的三倍多，由于溴酚蓝与牛胰岛素和牛胰岛素淀粉样纤维结合后荧光强度的明显差异性，表明溴酚蓝可以作为探针准确检测牛胰岛素淀粉样纤维。用溴酚蓝追踪监测牛胰岛素淀粉样纤维的形成过程，第一阶段荧光强度变化较为缓慢，第二阶段荧光强度迅速增强，第三阶段荧光强度变为较为平稳。在制备牛胰岛素淀粉样的过程中，加入溴酚蓝后，圆二色谱图显示牛胰岛素的二级结构没有出现应该有的变化，即溴酚蓝的加入成功抑制了牛胰岛素淀粉样纤维的形成。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，特别是涉及溴酚蓝在作为检测牛胰岛素淀粉样纤维探针和作为牛胰岛素淀粉样纤维抑制剂方面的应用。

背景技术

蛋白的错误折叠导致的淀粉样纤维生成是诱发很多相关疾病的关键因素。长久以来，淀粉样纤维的研究是近年来在化学、生物学、医学方面的重要课题。越来越多的研究主要是因为淀粉样纤维的产生与许多疾病直接相关，有关报道指出大概有几十种疾病是因为形成淀粉样纤维引起的，例如：阿尔兹海默症，帕金和亨廷顿病,海绵状脑病，II型糖尿病，心率不齐，类风湿性关节炎，动脉粥样硬化，催乳素瘤，多神经病等等。因此，对淀粉样纤维的识别以及抑制的研究在推动发展淀粉样纤维形成的机理和促进发展医学诊断救治的手段上有着重要的意义。

发明内容

溴酚蓝的结构式如下所示，溴酚蓝可以特异性识别牛胰岛素淀粉样纤维。在作为检测牛胰岛素淀粉样纤维探针和作为牛胰岛素淀粉样纤维抑制剂方面得到应用。

附图说明

图1：在牛胰岛素溶液(曲线1)与牛胰岛素淀粉样纤维溶液(曲线2)中分别加入溴酚蓝水溶液的荧光光谱图；

图2：利用溴酚蓝监测牛胰岛素淀粉样纤维形成过程的相对荧光强度曲线图； I₀为溴酚蓝水溶液的荧光强度，I为将溴酚蓝水溶液加入牛胰岛素后溶液的荧光强度。

图3：不加入溴酚蓝的溶液，牛胰岛素在25mM、NaCl/HCl(pH＝1.6),65℃条件下孵育0min和600min的圆二色谱图(纵坐标表示椭圆率，横坐标表示波长)；

图4：加入溴酚蓝的溶液，牛胰岛素在25mM、NaCl/HCl(pH＝1.6),65℃条件下孵育0min和600min的圆二色谱图(纵坐标表示椭圆率，横坐标表示波长。仪器：圆二色谱仪)。

具体实施方式

实施例1：

PBS缓冲液配方：19mL、0.2M NaH₂PO₄水溶液和81mL、0.2M Na₂HPO₄水溶液的混合。配制1mM溴酚蓝水溶液，取0.02mL溴酚蓝水溶液分别加入到0.01mL、2.5mM牛胰岛素的PBS缓冲液溶液(牛胰岛素在PBS缓冲液中可以稳定存在，不会生成淀粉样纤维)中和0.01mL、2.5mM牛胰岛素淀粉样纤维 NaCl/HCl溶液中(用HCl调节NaCl水溶液的pH＝1.6，然后将牛胰岛素加入到 NaCl水溶液中，牛胰岛素的浓度为2.5mM，在65℃条件下孵育3小时，得到牛胰岛素淀粉样纤维溶液；NaCl水溶液中NaCl的浓度是25mM)，再加入0.97mL PBS缓冲液稀释，将上述溶液放到荧光光谱仪中测试其荧光强度。荧光光谱图显示溴酚蓝加到牛胰岛素淀粉样纤维溶液后，荧光强度是牛胰岛素溶液与溴酚蓝混合后的三倍多，如图1。由于溴酚蓝与牛胰岛素和牛胰岛素淀粉样纤维结合后荧光强度的明显差异性，表明溴酚蓝可以作为探针准确检测牛胰岛素淀粉样纤维。

实施例2：