[发明专利]一种诱导肝细胞体外扩增的方法

说明书

本发明涉及一种诱导肝细胞体外扩增的方法。本发明还涉及Myosin抑制剂尤其是(‑)‑Blebbistatin和通过所述方法获得的肝细胞在诱导肝细胞体外扩增、构建生物人工肝和构建肝脏疾病模型中的应用。本发明的方法只需单个小分子或单因素处理，操作简单，重复性好，并且在体外可高效进行，不涉及转录因子重编程技术和复杂的转基因操作，能够长期扩增，并且小分子扩增的肝细胞也仍然具有功能。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种诱导肝细胞体外扩增的方法。

背景技术

肝脏是人体内最大的内部器官，其是代谢的主要场所。肝细胞在肝脏中占85％。肝细胞在体内具有强大的再生潜能，将正常的肝脏切除三分之二后可以在仅一周内通过细胞增殖恢复到原来体积。然而，遗憾的是，尽管人类肝脏在体内可以迅速再生，但原代肝细胞在体外培养条件下仅能短暂增殖而不能长期增殖，到目前为止，努力在实验室扩展人类肝细胞会导致代谢功能低的永生化癌细胞。人体肝细胞的稀缺和肝细胞扩展时功能丧失是科学、医学和药学发展的主要瓶颈，解决这一问题将有助于促进肝细胞体外药物代谢、药物毒性、终末期肝病细胞治疗、构建出生物人工肝来支持等待移植的患者、疾病模型构建等研究和应用。

目前，该领域内最常用的方法为转录因子重编程技术，但是此类技术由于外源基因片段的插入使得进入临床应用的风险较大。前期有研究发现，采用小分子重编程技术，中日两个研究团队分别成功地实现了原代肝细胞在体外向肝前体细胞的转变和快速增殖，经定向诱导分化后，增殖的前体样肝细胞可重新获得成熟肝细胞的功能，移植入小鼠体内可达70％以上的整合。采用小分子化合物重编程技术，所得到的肝细胞未经过任何的基因改造，因而更为接近体内细胞的初始状态，对于将来的临床应用更为安全有效。该领域仍然存在使用小分子化合物来诱导肝细胞体外扩增的强烈需求。

发明内容

本发明人经过不断的探索，意外地发现Myosin抑制剂能显著地促进肝细胞长期扩增，进而实现上述目的。

因此，本发明总体上涉及Myosin抑制剂在诱导肝细胞体外扩增中的应用。

本发明还涉及Myosin抑制剂在构建生物人工肝中的应用。

本发明还涉及Myosin抑制剂在构建肝脏疾病模型中的应用。

优选地，所述Myosin抑制剂为(-)-Blebbistatin。

本发明还涉及一种诱导肝细胞体外扩增的方法，其特征在于，包括以下步骤：将肝细胞培养在培养基中，在培养基中加入Myosin抑制剂，继续培养，从而诱导肝细胞体外扩增。优选地，所述Myosin抑制剂为(-)-Blebbistatin。

本发明还涉及通过所述方法获得的肝细胞。

本发明还涉及包含所述肝细胞的试剂、生物人工肝、研究工具或诊断工具。

本发明还涉及使用所述诱导肝细胞体外扩增的方法或通过所述方法获得的肝细胞的肝脏疾病模型。

本发明还涉及通过所述方法获得的肝细胞在构建生物人工肝中的应用。

本发明还涉及通过所述方法获得的肝细胞在构建肝脏疾病模型中的应用。

上述应用可以是治疗性应用，也可以是非治疗性应用。

本发明的方法只需单个小分子或单因素处理，操作简单，重复性好，并且在体外可高效进行，不涉及转录因子重编程技术和复杂的转基因操作，能够长期扩增，并且小分子扩增的肝细胞也仍然具有功能。

本文中的术语的含义如下：

BMP4：骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein，bmp4)。