[发明专利]一种基于免标记荧光增强的适配体DNA银纳米簇测定铅离子的方法

权利要求书

1.一种基于免标记荧光增强的适配体DNA银纳米簇测定铅离子的方法，其特征在于：以铅离子适配体的DNA-Ag NCs模板为识别原件，将铅离子适配体的DNA-Ag NCs模板与标准浓度的铅离子溶液混合于Tris-acetate缓冲液中加热反应，随后加入AgNO₃溶液混匀避光反应，再加入NaBH₄ 溶液避光反应，室温下测定反应所获得的溶液中标准浓度的铅离子溶液的荧光值获得标准曲线；将标准浓度的铅离子溶液用待测样品替换进行反应，并测定荧光值，结合标准曲线获得待测样品铅离子浓度；

所述DNA-Ag NCs 模板的序列为5´-ctcctcctaccctttgtgggtagggcgggttggaaactcctcctaccc-3´，由48个碱基组成，其中两端为银纳米簇成核富C序列，中间为铅离子适配体富G序列部分，即铅离子特异性识别的寡核苷酸，划线部分ttt和aaa为成核富C序列和适配体富G序列的连接部分。

2.根据权利要求1所述的一种基于免标记荧光增强的适配体DNA银纳米簇测定铅离子的方法，其特征在于：具体步骤如下：

（1）标准浓度铅离子溶液与DNA-Ag NCs 模板混合：将DNA-Ag NCs 模板和标准浓度的Pb²⁺ 溶液在5mM，pH为7.0的Tris-acetate 缓冲液中混合，85℃加热15min，自然冷却到4℃，其中DNA-Ag NCs 模板和Pb²⁺ 溶液的浓度分别为0.3μM和0-500nM；

（2）加入AgNO₃进行反应：在步骤（1）所获得的溶液中加入AgNO₃溶液混匀，在4℃下避光反应20min，然后加入新制的NaBH₄溶液充分搅拌1min，在4℃下避光反应1h获得DNA-AgNCs；其中DNA-Ag NCs模板和AgNO₃、NaBH₄的最终浓度比为1:6:6；

（3）绘制标准曲线：室温下测定步骤（2）所制备的加入相应标准浓度铅离子溶液的荧光值，根据荧光值与浓度的对应关系绘制标准曲线；

（4）待测样品的检测：将标准浓度的铅离子溶液用待测样品替换，按照步骤（1）和（2）进行反应，制备含待测铅离子的DNA-Ag NCs并测定其荧光值，结合标准曲线计算得到待测样品铅离子浓度。

3.根据权利要求2所述的一种基于免标记荧光增强的适配体DNA银纳米簇测定铅离子的方法，其特征在于：步骤（2）所制备的DNA-Ag NCs的平均粒径约为1nm。