[发明专利]一种人脐带华通氏胶组织的冻存保护液及其制备与应用

说明书

本发明提供了一种人脐带华通氏胶组织冻存保护液及其制备与应用，通过渗透性保护剂和非渗透性保护剂分别平衡细胞内外的电解质浓度，同时降低自由水的含量、减少冰晶形成，一方面避免外部高渗环境导致细胞过度脱水、造成细胞损伤，另一方面可降低冰晶对细胞的物理性损伤；添加蛋白组合物可以为细胞提供所需的养分，从而提高细胞的存活率；亲水性胶体可以在水中形成触变胶，使渗透性保护剂中的各成分分布均匀，并可使细胞在其中均匀分散、不易出现沉淀，并且易于取用和存放。通过上述成分组合使用，可以有效提高华通氏胶组织的活性和抗逆性，从而提高细胞冻存时和复苏后的存活率、减少冻存造成的细胞活性损失。

技术领域

本发明属于人体组织冻存技术领域，特别涉及一种人脐带华通氏胶组织冻存保护液及其制备与应用。

背景技术

脐带是哺乳类动物连接胎儿和胎盘的管状结构，用于为胎儿提供营养物质、输送代谢产物。脐带血中含有丰富的间充质干细胞，间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞，是形成人体各种组织器官的原始细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞或组织器官，医学界称为“万用细胞”，适用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复的种子细胞。华通氏胶是脐带羊膜和血管间的凝胶状填充物，富含黏多糖、成纤维细胞和巨噬细胞，其中部分细胞具有干细胞的特质和分化潜能，因此成为用来分离间充质干细胞的理想材料。因此，对华通氏胶进行存储，可以提供重要的医学材料。传统的程序化冻存由于容易使液体产生结晶，往往会对细胞造成机械性损伤；新式的玻璃化冻存可以完全避免结晶问题，从而大大提高冻存细胞的复苏率。但是，玻璃化冻需要使用具有细胞毒性的二甲基亚砜，容易对细胞造成化学性伤害；而简单地对现有冻存液的成分进行增减或调整用量，对冻存效果的提升有限。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种人脐带华通氏胶组织冻存保护液及其制备与应用。

本发明具体技术方案如下：

本发明一方面提供了一种人脐带华通氏胶组织的冻存保护液，包括如下重量份数的成分：

15～20份渗透性保护剂、10～15份非渗透性保护剂、4～8份蛋白组合物以及0.8～1.5份亲水性胶体；

所述渗透性保护剂包括二甲基亚砜、甘油、肌醇、甘露醇以及脯氨酸中的至少一种；

所述非渗透性保护剂包括海藻糖、聚蔗糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮以及羟乙基淀粉中的至少一种；

所述蛋白组合物包括牛血清白蛋白、植物源重组人血清白蛋白、酪蛋白、乳清蛋白、γ-球蛋白以及抗冻蛋白中的至少一种；

所述亲水性胶体包括角叉菜胶、明胶、黄芪胶、罗望子胶以及桃胶中的至少一种。

渗透性保护剂可以渗透到细胞内，平衡细胞内外未结冰的水溶液中电解质的浓度，从而避免外部的高渗环境导致细胞过度脱水、造成细胞损伤；非渗透性保护剂分子量较大、不能渗透到细胞内，一方面通过优先与细胞外溶液中的水分子结合，降低自由水的含量、使冰点降低、从而减少冰晶的形成，另一方面可以降低溶液中电解质的浓度，从而减轻溶质损伤；蛋白组合物可以为细胞提供所需的养分，从而提高细胞的存活率。亲水性胶体可以在水中形成触变胶，不需加热、只靠震荡等机械力就可使凝胶变为溶胶，方便使用；静置一段时间即可从溶胶变回凝胶状态，使渗透性保护剂中的各成分分布均匀，并可使细胞在其中均匀分散、不易出现沉淀，有效保持细胞的活力和遗传稳定性，并且易于取用和存放。

进一步地，所述渗透性保护剂包括重量份数比为1:1～2:1～3的二甲基亚砜、脯氨酸以及肌醇。

二甲基亚砜是最常用的冷冻保护剂，效果优异但毒性较大，因此本发明中采用上述组合，以便减少二甲基亚砜的用量、降低细胞毒性，同时不影响冷冻保护剂的效果。

进一步地，所述非渗透性保护剂包括重量份数比为1:1～2的海藻糖以及羟乙基淀粉。