[发明专利]提高安丝菌素P-3生产的方法

说明书

一种生物反应器中珍贵橙色束丝放线菌提高安丝菌素P‑3产量的分批补料发酵工艺，其特征在于，基于野生型菌株珍贵橙色束丝放线菌ATCC31565的共表达菌株Oasm13‑17:asmUdpg划线YMG平板上常温培养至长出白色气生菌丝后移至种子培养基中摇床培养，然后取种子液并移至二级培养基中进行再次摇床培养后得到发酵种子液；最后将发酵种子液接种至含有发酵培养基的发酵罐中，通过动态补液实现优化发酵。本发明的分批补料策略可以使得安丝菌素P‑3的产量相比于批次培养提高0.8～2.35倍。

技术领域

本发明涉及的是一种发酵工程领域的技术，具体涉及一种通过在生物反应器中分批补料培养尤其是分批补加果糖策略以提高生物反应器中安丝菌素P-3产量的方法。

背景技术

安丝菌素P-3(AP-3)是珍贵橙色束丝放线菌(Actinosynnema pretiosum)中产生的美登醇类化合物(Higashide E等，Nature，2002，270(5639)：721-722)，由于其优异的抗肿瘤活性，AP-3被广泛用作抗体偶联药物(ADCs)的毒性分子。其中，AP-3作为导弹药物的曲妥珠单抗自2013年以来已经在美国、加拿大、欧盟、和日本等多个国家被批准用于乳腺癌的靶向治疗，这是首个用于实体瘤的ADCs(Martínez,M等，Critical Reviews in Oncology/Hematology.2016,97,96-106.)。目前，以AP-3作为效应分子ADCs很多处于临床(前)研究中，近年研究发现，AP-3及其类似物，对其他癌症也具有很强的抗性(Taft F等，Chemistry-A European Journal，2012，18(3)：880-886)，展示了其良好的应用前景。但是，目前AP-3产量水平仍较低，这限制了其广泛的工业化应用，因此，提高AP-3的生物合成产量具有重要的应用价值。

目前报道提高AP-3产量的方法集中在突变株筛选、培养基优化、培养工艺优化和代谢工程改造等方面。通过紫外和MNNG诱变技术结合得到一株高产突变株Actinosynnemapretiosum PF4-4(ATCC PTA 3921)摇瓶发酵20mL/250mL条件下最终确认有效的产量最高可以达到401mg/L，并在1500L规模发酵罐中通过优化分批补料工艺，在发酵过程中补加葡萄糖和异丁醇，最终AP-3产量为304mg/L(CN 101103120A、WO 03/064610A2)。董清风等人(CN 103805648A)在150-L规模生物反应器中采取分批补料策略，发酵结束后AP-3产量为290mg/L，并且研究了分批补料和重复分批补料相结合的策略，最终AP-3产量提高到410mg/L。尽管国内对AP-3发酵生产在生物反应器中有一定研究，但是目前AP-3的发酵产量仍然较低，生产成本高，因此优化AP-3发酵工艺，进一步提高AP-3的产量，具有重要意义。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述不足，提出一种生物反应器中珍贵橙色束丝放线菌提高安丝菌素P-3产量的分批补料发酵工艺，可以使得安丝菌素P-3的产量相比于批次培养提高0.8～2.35倍。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明基于基于野生型菌株珍贵橙色束丝放线菌ATCC31565的共表达菌株Oasm13-17:asmUdpg划线YMG平板上常温培养至长出白色气生菌丝后移至种子培养基中摇床培养，然后取种子液并移至二级培养基中进行再次摇床培养后得到发酵种子液；最后将发酵种子液接种至含有发酵培养基的发酵罐中，通过动态补液实现优化发酵。