[发明专利]广谱低致瘤性MDCK细胞系及其应用

说明书

本发明涉及广谱低致瘤性MDCK细胞系及其应用，所述的细胞株为MDCK‑15D3和MDCK‑6A8，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号分别为CCTCC NO:C2017155和CCDTCC NO:C2017154，地址，湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，邮编430072，电话027‑68752319。本发明还涉及所述的细胞株的培养方法，以及所述的MDCK‑15D3、MDCK‑6A8细胞株在制备预防或治疗流感的产品中的应用。

技术领域

本发明属于医药生物领域，具体而言，涉及广谱低致瘤性MDCK细胞系及其应用。

背景技术

事实证明，不管是季节性流感，还是大流行流感肆虐人类的时候，接种流感病毒疫苗相对于使用抗流感的化学药物是更经济有效的防控手段，因此，流感病毒疫苗的研制有着非常重大和现实的意义。目前大部分流感疫苗的生产是基于鸡胚来进行的，该套生产方法已经有60多年的历史，工艺已经相当成熟，虽然部分工序可以实现自动化，但生产周期还是很长，不利于质量控制和保证，且鸡胚培养的流感病毒经过连续传代后常常会发生基因序列变异，使所制备的流感疫苗与人群中流行的流感毒株不能完全匹配。另外，在禽流感高发期，可能会因为鸡的大量感染死亡而缺乏制备疫苗的原料，此时如果仍使用鸡胚生产流感疫苗，则存在着极大的安全隐患。因此，WHO建议用哺乳动物细胞培养流感病毒来替代鸡胚制备流感疫苗，这样不仅可使其抗原性更接近自然流行株，同时还可减少宿主蛋白成分，降低鸡胚残留物引起的过敏反应。

MDCK(Madin-Darby canine kidney)细胞为连续传代细胞，是Madin和Darby在1958年从一只健康成年母狗(cocker spaniel，可卡犬，一种英国的小猎犬)的肾组织得到的，由于该细胞对流感病毒比较敏感，目前广泛应用于流感病毒的增殖和感染性滴度检测，而且经常用于流感病毒的分离培养。

1997年，荷兰Solvay公司以A/Taiwan/1/86(H1N1)为毒种，基于无血清培养的MDCK细胞为基质的亚单位疫苗在I期临床中获得良好的效果，与其公司已经商品化的基于鸡胚的流感疫苗具有相同效果(Palache,A M等，J Infect Dis.1997,176:20-23.)。2002年，加拿大BioChem Pharma公司基于MDCK细胞的流感疫苗在健康成人、老年人和儿童的I期和II临床实验中都表现出良好的安全性和免疫原性，大约有83％～100％的受试人群在接种疫苗后血凝抑制滴度可超过40，对三价季节性流感的三种病毒的抗体反应也与传统鸡胚来源的流感疫苗相似(Scott A等，Vaccine,1998,16(13):1331-1335.和2002,20(7-8):1240-1247.)。目前，瑞士Novartis公司以MDCK细胞为基质的流感疫苗在I期和II临床实验中同样表现出良好的效果，在受试人群中表现出与基于鸡胚的流感疫苗相似的耐受性和免疫原性，完全达到了欧洲人用药品委员会(EU Committee for Medicinal Products for HumanUse)会制定的关于流感疫苗的相关标准(N.Grotha等，Vaccine,2009,27(5):786-791)。

虽然MDCK细胞对大部分流感病毒比较敏感，非常适合规模化生产用，制备的疫苗在人体内也能产生较好的免疫原性和抗体保护水平，但目前尚未得到WHO或我国相关部门的批准可用于人用流感疫苗的生产，其最重要和最直接的原因就是其潜在的致瘤性、致畸性、外源因子污染等安全性问题还有待解决。另外MDCK细胞表面存在的流感病毒受体的类型和数量是不同的，因此对流感病毒的增值能力也是不尽相同得，不同单克隆株之间增值能力相差可达到20倍。