[发明专利]一种用于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞的消化液试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞的消化液试剂盒，其特征在于：含有以下四种浓度的胰蛋白酶-乙二胺四乙酸消化液，分别为A液、B液、C液和D液，其中，A液含有胰蛋白酶的质量浓度为0.15％，B液含有胰蛋白酶的质量浓度为0.08％，C液含有胰蛋白酶的质量浓度为0.04％，D液含有胰蛋白酶的质量浓度为0.02％。

2.根据权利要求1所述的一种用于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞的消化液试剂盒，其特征在于：所述消化液试剂盒需要在-20℃下存放，并且需要在4℃下融化分装。

3.一种用于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞的方法，其特征在于：通过使用权利要求1或2所述的一种用于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞的消化液试剂盒进行分离原代小鼠胚胎成纤维细胞，具体包括以下步骤：

步骤一，剪碎：将去掉头尾四肢和内脏的小鼠胚胎剪碎后放入A液中，并在室温下继续进行剪碎，得到剪碎组织；

步骤二，A液消化：步骤一的剪碎组织在A液中进行消化作用一定时间，然后收集上清液，并往上清液中加入培养液以中止胰蛋白酶的消化；

步骤三，B液消化：将步骤二中收集上清液后剩下的沉淀悬液加入B液中进行消化作用一定时间，然后收集上清液，并往上清液中加入培养液以中止胰蛋白酶的消化；

步骤四，C液消化：将步骤三中收集上清液后剩下的沉淀悬液加入C液中进行消化作用一定时间，然后收集上清液，并往上清液中加入培养液以中止胰蛋白酶的消化；

步骤五，D液消化：将步骤四中收集上清液后剩下的沉淀悬液加入D液中进行消化作用一定时间，然后收集上清液，并往上清液中加入培养液以中止胰蛋白酶的消化；

步骤六，培养：将步骤二至步骤五中收集的并加入了培养液的上清液混合后，进行离心得到细胞沉淀，然后用培养液对细胞沉淀进行悬浮，然后接种在培养瓶上培养。

4.根据权利要求3所述的一种用于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞的方法，其特征在于：所述步骤一中，利用眼科剪进行剪碎。

5.根据权利要求3所述的一种用于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞的方法，其特征在于：所述步骤二至步骤五中，所述消化作用的温度均为36℃～38℃，所述消化作用的时间均为3min～7min。

6.根据权利要求5所述的一种用于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞的方法，其特征在于：所述步骤二至步骤五中，所述消化作用的温度均为37℃，所述消化作用的时间均为5min。

7.根据权利要求3所述的一种用于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞的方法，其特征在于：所述步骤二至步骤五中，所述培养液均为含胎牛血清的DMEM。

8.根据权利要求7所述的一种用于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞的方法，其特征在于：所述培养液均为含体积分数为10％～20％的胎牛血清的DMEM。

9.根据权利要求3所述的一种用于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞的方法，其特征在于：所述步骤六中，接种在培养瓶上培养的培养条件为：将培养瓶置于含体积分数5％的CO₂，温度为37℃的饱和湿度培养箱中培养。