[发明专利]一种马齿苋愈伤组织诱导及生产类黄酮的方法

说明书

本发明提供一种马齿苋愈伤组织诱导及生产类黄酮的方法，属于愈伤组织诱导领域，以马齿苋种子萌发7d后幼苗胚轴做为外植体，接种在MB5+ 1.0 mg/L 6‑BA +0.5 mg/L 2,4‑D + AgNO3 4.0mg/L培养基中，在蓝光下培养30d后，增殖系数及类黄酮含量最高。本发明方法简单，为马齿苋的工厂化生产类黄酮提供更快和有效的途径。

技术领域

本发明属于愈伤组织诱导领域，具体涉及一种马齿苋愈伤组织诱导及生产类黄酮的方法。

背景技术

马齿苋（Portulaca oleracea L），又可称其为长寿菜、长命草等，是当年内能完成全部生长周期的肉质野生草本植物，因其根（白色）、茎（红色）、叶（绿色）、花（黄色）和种子（黑色）的颜色不同，在《本草图经》内又被称为五行草”。马齿苋广布中国大江南北，适应性极强，且具有与其他一般野生植物一样保护自我的特性，抗热及耐干旱的特性明显。马齿苋之所以得到广大消费者和学者的喜爱与关注，是因为它不仅含有一定药用价值的矿物质、氨基酸、多糖、脂肪酸、维生素、生物碱、酸类和黄酮类物质等多种化学成分，还具有抗菌止血、散血消肿、杀虫杀菌、消炎利尿、清热解毒、利水去湿、增强免疫和抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等功能，是经国家卫生部认证的保健食品之一。近年来，马齿苋在化学成分、临床应用、保健食品的加工与栽培技术方面的研究较多，因马齿苋即可食用又可药用，但野生资源匮乏，学者也加强了马齿苋在组织培养方面的应用，用以满足对种子资源的需求和培育出高产优质的马齿苋品种。国内关于马齿苋植物组织培养的研究首次报道出现于2003年。邱宁宏、李焘对马齿苋的组织培养与快速繁殖的研究，建立了植株再生体系，在MS培养基中附加0.5-2.0 mg/L 6-BA 和0.5 mg/L 2,4-D有利于以子叶、胚轴为外植体进行愈伤组织的诱导。后来的研究学者也得到相同结果。

光是植物生长发育中最重要的一个环境因子。它除了是一种能控制光合作用的能源，还是一种能影响组织生长的诱导信号。组培苗体内不同的光受体感知到光信号，从而影响到组培苗的生长发育、光合特性及性状表现。对于光质应用在植物愈伤组织诱导及生长方面，已报道出多种植物在此方面的研究，如赵德修等研究的水母雪莲、张真等研究的葡萄、马琳等研究的大蒜、郭君丽等研究的47号怀山药等，这些研究结果均表明植物愈伤组织诱导或生长受到光质的影响很大，适宜的光质有利于愈伤组织诱导和生长对。因此光质在马齿苋愈伤组织诱导与生长的影响有一定的研究意义，通过本发明期望为马齿苋愈伤组织的工厂化生产类黄酮提供更快和有效的途径。

发明内容

本发明的目的在于提供一种马齿苋愈伤组织诱导及生产类黄酮的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种马齿苋愈伤组织诱导及生产类黄酮的方法，所述方法为马齿苋种子萌发7d后幼苗胚轴做为外植体，接种在MB5+ 1.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L 2,4-D + AgNO₃ 4.0mg/L培养基中，在蓝光下培养30d。培养条件为每一天光照12h，温度25℃。

幼苗的培养方法为：先用滤纸将马齿苋的种子包裹，再将其在放入50-55℃的温水中浸泡10-15min，进行温汤浸种消毒，然后用流水冲洗20 min；然后在75%的酒精中将滤纸包裹的种子消毒60s；然后在0.1% HgCl₂中消毒8min，期间不断进行搅拌；然后用无菌水冲洗4-5次；最后接种到经过高压灭菌处理过的MS基本培养基中，将其放在光照强度2000~3000lx，光照时间12h/d，温度25±2℃条件下进行培养，获得无菌幼苗。

本发明的优点在于：

1.建立了快速高效的马齿苋愈伤组织诱导体系，节省培养时间

2.建立了提高马齿苋愈伤组织中类黄酮含量的培养条件，可以实现马齿苋类黄酮周年生产，节省资源。

具体实施方式