[发明专利]热稳定的葡糖淀粉酶及其使用方法

权利要求书

1.一种具有葡糖淀粉酶活性的多肽，所述多肽选自由以下组成的组：

(a)多肽，所述多肽包含与SEQ ID NO:3的多肽具有至少95％，例如甚至至少96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；

(b)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸在至少低严格条件、更优选地至少中严格条件、甚至更优选地至少中-高严格条件、最优选地至少高严格条件、以及甚至最优选地至少非常高严格条件下与以下项杂交

(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列，

(ii)包含SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，或者

(iii)(i)或(ii)的全长互补链；

(c)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸包含与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有优选地至少75％，更优选地至少80％，更优选地至少85％，更优选地至少90％，更优选地至少91％，更优选地至少92％，甚至更优选地至少93％，最优选地至少94％，以及甚至最优选地至少95％，如甚至至少96％、97％、98％、99％或100％同一性的核苷酸序列；

(d)变体，所述变体包含SEQ ID NO:3的多肽的一个或多个(例如，几个)氨基酸的取代、缺失、和/或插入；以及

(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的具有葡糖淀粉酶活性的片段。

2.一种多核苷酸，所述多核苷酸包含编码如权利要求1所述的多肽的核苷酸序列。

3.一种载体，所述载体包含有效地连接至一个或多个控制序列的如权利要求2所述的多核苷酸，所述控制序列控制所述多肽在表达宿主内的产生。

4.一种重组宿主细胞，所述重组宿主细胞包含如权利要求2所述的多核苷酸。

5.如权利要求4所述的宿主细胞，所述宿主细胞是产乙醇微生物。

6.如权利要求4或5所述的宿主细胞，所述宿主细胞进一步表达和分泌一种或多种选自下组的另外的酶，该组包含蛋白酶、半纤维素酶、纤维素酶、过氧化物酶、脂肪分解酶、金属脂肪分解酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、过水解酶、角质酶、果胶酶、果胶酸裂合酶、甘露聚糖酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂加氧酶、木质酶、α-淀粉酶、支链淀粉酶、植酸酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、马来酸酶(malanase)、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、漆酶、转移酶、或其组合。

7.一种用于糖化含淀粉材料的方法，所述方法包括以下步骤：i)使所述含淀粉材料与α-淀粉酶接触；和ii)使所述含淀粉材料与葡糖淀粉酶在至少70℃的温度下接触；其中所述方法从所述含淀粉材料(底物)产生至少70％的游离葡萄糖。

8.如权利要求7所述的方法，其中步骤(ii)在至少75℃、优选地至少80℃的温度下进行12与96小时之间，优选地进行18至60小时。

9.如权利要求7或8所述的方法，其中所述葡糖淀粉酶在至少70℃的温度，和/或在2.0与7.0之间的pH、优选在pH 4.0与pH 6.0之间、更优选在pH 4.5与pH 5.5之间，保持至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％的相对活性。

10.如权利要求7-9中任一项所述的方法，其中所述方法包括顺序或同时进行步骤(i)和步骤(ii)。

11.如权利要求7-10中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括在糖化步骤ii)之前的预糖化。

12.如权利要求7-11中任一项所述的方法，其中所述葡糖淀粉酶是如权利要求1所述的多肽。

13.如权利要求7-12中任一项所述的方法，其中步骤(i)在所述含淀粉材料的糊化温度或低于糊化温度下进行。