[发明专利]确定肿瘤样品中存在靶抗原的方法

说明书

本发明涉及基于细胞的确定原发肿瘤样品中抗原表达的新测定法。该方法进一步涉及确定原发肿瘤样品中的抗原和蛋白酶表达。该方法允许稳健确定抗原和/或蛋白酶表达，无需消化肿瘤样品。该方法进一步允许为治疗肿瘤选择抗体和选择蛋白酶可切割接头。

技术领域

本发明涉及基于细胞的确定原发肿瘤样品中抗原表达的新测定法。该方法进一步涉及确定原发肿瘤样品中的抗原和蛋白酶表达。该方法允许稳健确定抗原和/或蛋白酶表达，无需消化肿瘤样品。该方法进一步允许为治疗肿瘤选择抗体及选择蛋白酶可切割接头。

背景技术

直至现在，化疗仍是一个最常使用的癌症疗法。另外，基于抗体的疗法已经历最近15年演进并且现在代表肿瘤治疗方面有价值的组合或化疗方案替代。不同于化疗，抗体疗法靶向癌细胞上的特定抗原，因此允许定向性更强的治疗，因而减少对健康组织的副作用。在基于抗体的治疗用药剂开发中，需要多种测定法以鉴定最佳候选物来投入临床试验并最终投入市场。在最早期临床前阶段，必须生成抗体并分析它们的靶特异性，以及它们对靶的亲和力和功能。可以使用各种蛋白质-蛋白质相互作用测定法，如基于FRET的方法、表面等离子体共振(SPR)、荧光激活细胞分选法(FACS)或Alpha Screen^TM，分析结合特性。通常在多种基于细胞的测定法中检验功能，所述测定法设计成尽可能逼真模仿生理情景，以鉴定在动物模型中待测试的最佳候选物，之后进入临床试验。通常使用原代细胞、肿瘤细胞系或设计成特定途径激活时表达报道分子的报道细胞，实施这些功能测定法。

但是，培养的细胞系或原代细胞可能不是肿瘤组织的全面模型，所述肿瘤组织通常是更复杂的细胞三维组合体。在另一方面，功能测定法对于培养的细胞稳健和直观，因为可以对单一细胞测量试验参数，如抗体结合或功能，例如，靶细胞杀伤作用。因为数个障碍，直接评估肿瘤样品难得多。除肿瘤细胞之外，肿瘤还含有复杂的胞外基质环境，其部分地或完全由肿瘤中的细胞分泌胞外基质组分产生。胞外基质可以限制抗体渗入肿瘤组织，而且还可能干扰肿瘤细胞上细胞表面靶的可及性。但是，胞外组分也可以含有可能对靶向的免疫疗法有价值的额外抗原元件或功能元件。

总之，需要更全面和稳健的在肿瘤样品、尤其衍生自肿瘤活组织检查的肿瘤样品上直接确定抗体结合作用和功能的测定法。

最近，靶向的免疫疗法(激活免疫系统自身元件以攻击肿瘤细胞)正变成克服肿瘤免疫耐受性的战斗中的利剑。包含能够识别肿瘤细胞的结合部分和活化免疫细胞的效应子部分的双特异性构建体已经显示有前景的结果。但是，在一些情况下，可能需要遮蔽效应子部分直至递送双特异性分子至肿瘤为止，以减少非特异性全身性副作用。一个实现这个目的的方案是用抗独特型结合部分遮蔽效应子部分，所述抗独特型结合部分能够可逆结合效应子部分并使用蛋白酶可切割接头，将起到遮蔽作用的部分与双特异性免疫治疗抗体连接。熟知肿瘤，尤其恶性肿瘤，包含在健康成年组织中不表达或不以其活性形式存在的蛋白酶。具有蛋白酶可切割接头的构建体因此能用来导引新类别的双特异性抗体的活性至肿瘤组织。

随着免疫疗法用构建体的复杂性增加，对于全面环境下测量抗体结合作用和功能的测定法的要求也增加。在培养的细胞上的结合测定法可能不足以模拟肿瘤组织中的复杂环境。

本发明的发明人开发了一种在肿瘤样品(例如，肿瘤活组织检查样品)上将抗体和抗体样构建体的结合作用和功能评估直接组合的新测定法。这种新测定法可用于例如新抗体构建体早期开发中的筛选或表征目的以及用于选择合适的抗体治疗癌症。

这种新测定法代表了在肿瘤样品中筛选结合和靶向功能性的有价值工具，所述工具将允许在候选药物开发早期鉴定最好的构建体并且为患者确定合适的治疗。

发明概述

提供了一种确定肿瘤样品中存在靶抗原的体外方法，所述体外方法包括步骤：

i)提供肿瘤样品；

ii)提供报道细胞，所述报道细胞包含信号转导性细胞表面受体控制下的报道基因；