[发明专利]用于治疗人受试者中非年龄相关的听力损害的组合物和方法

权利要求书

1.组合物，所述组合物包含至少两种不同核酸载体，其中：

所述至少两种不同载体中的每种包含编码蛋白质耳畸蛋白(otoferlin)的不同部分的编码序列，多个编码部分中的每个的长度为至少30个氨基酸，其中所述多个编码部分的每个的氨基酸序列可以任选地与所述多个编码部分中的不同编码部分的氨基酸序列部分重叠；

所述至少两种不同载体中没有单一载体编码全长蛋白质耳畸蛋白；

所述编码序列中的至少一种包含跨越耳畸蛋白基因组DNA的两个相邻外显子的核苷酸序列，并且缺少所述两个相邻外显子之间的内含子序列；且

当导入哺乳动物细胞中时，所述至少两种不同载体彼此经历连环化或同源重组，从而形成编码全长蛋白质耳畸蛋白的重组核酸。

2.权利要求1的组合物，其中所述至少两种不同载体中的每种是质粒、转座子、粘粒、人工染色体或病毒载体。

3.权利要求1的组合物，其中所述至少两种不同载体中的每种是人类人工染色体(HAC)、酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1衍生的人工染色体(PAC)。

4.权利要求1的组合物，其中所述至少两种不同载体中的每种是选自腺伴随病毒(AAV)载体、腺病毒载体、慢病毒载体或逆转录病毒载体的病毒载体。

5.权利要求1的组合物，其中所述至少两种不同载体中的每种是AAV载体。

6.权利要求1-5中任一项的组合物，其中所述多个编码部分之一的氨基酸序列与所述多个编码部分中的不同编码部分的氨基酸序列重叠。

7.权利要求6的组合物，其中所述多个编码部分中每个的氨基酸序列与不同编码部分的氨基酸序列部分重叠。

8.权利要求7的组合物，其中重叠氨基酸序列的长度为约30个氨基酸残基至约1000个氨基酸残基。

9.权利要求1-5中任一项的组合物，其中所述载体包含两种不同载体，每种载体包含内含子的不同区段，其中所述内含子包含存在于耳畸蛋白基因组DNA中的内含子的核苷酸序列，且其中所述两个不同区段在序列上重叠至少100个核苷酸。

10.权利要求9的组合物，其中所述两个不同区段在序列上重叠约100个核苷酸至约800个核苷酸。

11.权利要求1-10中任一项的组合物，其中所述至少两种不同载体中每种的核苷酸序列的长度为约500个核苷酸至约10,000个核苷酸。

12.权利要求11的组合物，其中所述至少两种不同载体中每种的核苷酸序列长度为500个核苷酸至5,000个核苷酸。

13.权利要求1-12中任一项的组合物，其中所述组合物中不同载体的数目是2。

14.权利要求13的组合物，其中所述两种不同载体中的第一种包含编码所述蛋白质耳畸蛋白的N端部分的编码序列。

15.权利要求14的组合物，其中所述蛋白质耳畸蛋白的N端部分的长度为30个氨基酸至1600个氨基酸。

16.权利要求15的组合物，其中所述蛋白质耳畸蛋白的N端部分的长度为200个氨基酸至1500个氨基酸。

17.权利要求14-16中任一项的组合物，其中所述第一载体还包含启动子和Kozak序列中的一种或两种。

18.权利要求17的组合物，其中所述第一载体包含启动子，其是诱导型启动子、组成性启动子或组织特异性启动子。