[发明专利]用于靶向基因转移的方法和组合物

说明书

本发明提供了包含氨基酸序列中的修饰的AAV衣壳蛋白以及包含该修饰的AAV衣壳蛋白的病毒衣壳和病毒载体。本发明还提供了将本发明的病毒载体和病毒衣壳体内施用于细胞或受试者的方法。

优先权声明

本申请根据35 U.S.C. § 119(e)要求 2016年8月16日提交的美国临时申请No.62 /375,666的权益，其全部内容通过引用并入本文。

政府支持声明

本发明是在美国国立卫生研究院授予的资金号5103757的政府支持下完成的。政府拥有本发明的某些权利。

发明领域

本发明涉及来自腺相关病毒（AAV）的修饰衣壳蛋白以及包含其的病毒衣壳和病毒载体。特别地，本发明涉及修饰的AAV衣壳蛋白和包含其的衣壳，其可引入病毒载体中以对目标靶组织赋予所需的转导概况。

发明的背景

从动物组织和腺病毒原液中分离的新的腺相关病毒（AAV）毒株已扩展了可用于治疗性基因转移应用的AAV载体组。目前正全面努力绘制这些AAV分离株在动物模型中的组织趋向性。将AAV载体的归巢导向选择性器官的能力对于基因治疗和其他治疗应用有用。

腺相关病毒（AAV）已成为病毒基因转移的所选载体，并已在临床试验中显示出巨大的希望。重要的是通过视网膜下递送成功治疗视网膜。通过玻璃体内递送满足微创注射途径的开发，但通过该途径递送AAV导致不良的转导结果。内界膜（ILM）产生分隔玻璃体和视网膜的屏障。

本发明解决了本领域对具有所需靶向特征的核酸递送载体的需求。

发明概述

本发明提供了将核酸分子引入受试者的视网膜细胞和/或视网膜色素上皮细胞中的方法，其包括玻璃体内施用包含AAV4衣壳蛋白的腺相关病毒（AAV）血清型4（AAV4）载体，其中AAV4衣壳蛋白包含在氨基酸残基K530处的置换和/或进一步包含在氨基酸残基S584、N585、S586和N587中的一个或多个处的任意组合的置换，其中残基的编号基于SEQ ID NO: 4的氨基酸序列（AAV4衣壳蛋白的氨基酸序列）。

本发明还提供了将核酸分子引入受试者的视网膜细胞和/或视网膜色素上皮细胞中的方法，其包括玻璃体内施用包含AAV5衣壳蛋白的腺相关病毒（AAV）血清型5（AAV5）载体，其中AAV5衣壳蛋白包含在氨基酸残基K517处的置换和/或进一步包含在氨基酸残基S575、S576、T577和T578中的一个或多个处的任意组合的置换，其中残基的编号基于SEQ IDNO: 5的氨基酸序列（AAV5衣壳蛋白的氨基酸序列）。

本文另外提供了将核酸分子引入受试者的视网膜细胞和/或视网膜色素上皮细胞中的方法，其包括玻璃体内施用包含AAV7衣壳蛋白的腺相关病毒（AAV）血清型7（AAV7）载体，其中AAV7衣壳蛋白包含在氨基酸残基K533处的置换和/或进一步包含在氨基酸残基A587、A588、N589和R590中的一个或多个处的任意组合的置换，其中残基的编号基于SEQ IDNO: 7的氨基酸序列（AAV7 衣壳蛋白的氨基酸序列）。

本发明进一步提供了将核酸分子引入受试者的视网膜细胞和/或视网膜色素上皮细胞中的方法，其包括玻璃体内施用包含AAV8衣壳蛋白的腺相关病毒（AAV）血清型8（AAV8）载体，其中AAV8衣壳蛋白包含在氨基酸残基K533处的置换和/或进一步包含在氨基酸残基Q587、Q588、N589和T590中的一个或多个处的任意组合的置换，其中残基的编号基于SEQ IDNO: 8的氨基酸序列（AAV8衣壳蛋白的氨基酸序列）。