[发明专利]解除有用虾类的卵成熟抑制的方法

说明书

一种解除养殖虾类的卵成熟抑制的方法。本发明的目的在于提供使用RNA干涉的手法抑制虾类的卵成熟抑制基因的表达，从而解除卵成熟抑制的方法。具体而言，本发明为使用以养殖虾类的卵黄生成抑制激素(VIH)基因的mRNA为靶的双链RNA(dsRNA)，通过RNA干涉法，抑制虾类的卵黄生成抑制激素基因的表达，从而解除养殖虾类的卵成熟抑制的方法。

技术领域

本发明涉及使用分子生物学手法控制虾类的机体内原来的生物学功能的方法，具体而言，涉及使用RNA干涉的手法抑制虾类的卵成熟抑制基因的表达，从而解除卵成熟抑制的方法。

背景技术

当前，为了支援每年高达350万吨的凡纳滨对虾养殖生产，世界上每年约生产2,000亿尾幼虾，作为其母虾仅美国夏威夷州就生产·输出80万尾。人为地使包括凡纳滨对虾的对虾类成熟十分困难，目前进行眼柄切除来促进成熟。然而，眼柄切除不仅成熟成功率低，而且由于烧断虾的一边的眼柄，因此还遭到虐待动物的责难。开发代替眼柄切除的成熟促进技术，使计划地、有效地生产幼虾成为可能是紧迫的课题。

RNA干涉(RNAi)是通过双链RNA(dsRNA)序列特异性地切断mRNA，结果抑制基因表达的现象，据报告是生物共通的核酸级别的防御系统(参照非专利文献1)。在RNAi中，dsRNA通过Dicer酶(一种核糖核酸内切酶)的作用被加工生成siRNA(short interfering RNA：小干扰RNA)，siRNA作为引导RNA来识别靶序列，通过切断靶mRNA，抑制基因的表达。

当前，还没有为了在孵化场等人为地使虾类成熟·产卵来代替切除眼柄的技术。然而，近来报告以使用RNA干涉法在斑节对虾(Penaeus monodon)等虾类中抑制VIH的表达为目的的研究事例(参照非专利文献1、非专利文献2以及非专利文献3)。此外，还有宣称能够用相同的方法促进成熟的专利申请的事例(参照专利文献1)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：美国专利申请公开第US2015/0099702号说明书。

非专利文献

非专利文献1：Tiu and Chan,2007,FEBS Journal,274:4385-4395.

非专利文献2：Treerattrakool et al.,2008,FEBS Journal,275:970-980.

非专利文献3：Treerattrakool et al.,2013,Aquaculture,404-405:116-121.

发明内容

发明要解决的课题

本发明的目的在于提供使用RNA干涉的手法抑制虾类的卵成熟抑制基因的表达，从而解除卵成熟抑制的方法。

用于解决课题的手段

作为控制虾类的卵成熟的方法，本发明者们对利用RNA干涉的原理，使用与抑制虾类的卵成熟的基因的mRNA结合的dsRNA，抑制虾类的卵成熟抑制基因的表达进行了深入研究。该研究是基于生化学研究的为使有效控制成熟成为可能的第一步，而且是解除机体内抑制成熟的激素的基因表达的研究。结果发现，通过上述dsRNA，能够有效地抑制虾类的卵成熟抑制基因的表达，从而能够解除卵成熟的抑制。

进而，本发明者们发现，多个基因与卵成熟的抑制相关，通过混合使用能够抑制各个基因表达的多个dsRNA，能够更有效地抑制卵成熟抑制基因的表达，以至于完成本发明。

即，本发明如下所示。

[1]一种解除养殖虾类的卵成熟抑制的方法，其使用以养殖虾类的卵黄生成抑制激素(VIH)基因的mRNA为靶的双链RNA(dsRNA)，通过RNA干涉法，抑制虾类的卵黄生成抑制激素基因的表达。