[发明专利]确定雄性配子细胞的基因型

权利要求书

1.一种用于非破坏性获得小孢子的基因型的方法，所述方法包括：

a.分离包含四个四分体小孢子的小孢子四分体，

b.分开所述小孢子四分体以获得四个四分体小孢子，

c.对所述四个四分体小孢子中的三个进行基因分型；和

d.从步骤(c)中获得的基因型推断第四四分体小孢子的基因型。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述小孢子四分体来自玉蜀黍。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述小孢子四分体来自卡诺拉油菜。

4.如权利要求1所述的方法，其中将所述小孢子四分体在(b)中机械地分开，以获得四个四分体小孢子。

5.如权利要求4所述的方法，其中使用显微操纵器或细胞分选器将所述小孢子四分体机械地分开。

6.如权利要求4所述的方法，其中使用微流体系统将所述小孢子四分体机械地分开。

7.如权利要求1所述的方法，其中将所述小孢子四分体在(b)中化学地分开，以获得四个四分体小孢子。

8.如权利要求1所述的方法，其进一步包括在步骤(b)之后分离所述第四四分体小孢子。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述在对三个四分体小孢子进行基因分型之前，进行完整基因组扩增。

10.如权利要求1所述的方法，其中对三个四分体小孢子进行单独地基因分型，或者将qPCR应用于三个四分体小孢子的合并样品中。

11.如权利要求1所述的方法，其进一步包括基于以下来选择所述第四四分体小孢子：在至少一个基因座处的优选的基因型，完整基因组基因型，全基因组基因型，来自不同物种的至少一个染色体，包括但不限于简单性状和复杂性状的目的性状，突变，基因敲除、缺失或沉默，转基因基因座，重组单体型，另一基因型的遗传互补物，或其任何组合。

12.如权利要求11所述的方法，其中将所选择的第四四分体小孢子与染色体加倍剂接触以获得加倍小孢子。

13.如权利要求11所述的方法，其中单倍体胚是从所述所选择的第四四分体小孢子产生的。

14.如权利要求12所述的方法，其进一步包括从所述加倍小孢子产生双单倍体胚。

15.如权利要求13所述的方法，其中将所述单倍体胚与染色体加倍剂接触以产生双单倍体胚。

16.如权利要求12所述的方法，其中所述染色体加倍剂是秋水仙碱。

17.如权利要求15所述的方法，其中所述染色体加倍剂是秋水仙碱。

18.如权利要求14所述的方法，其进一步包括使所述双单倍体胚生长成双单倍体植物。

19.如权利要求15所述的方法，其进一步包括使所述双单倍体胚生长成双单倍体植物。

20.如权利要求11所述的方法，其进一步包括使用所选择的第四四分体小孢子来使雌性配子细胞受精。