[发明专利]调节重组蛋白生产状况的方法

说明书

本发明涉及在细胞培养基中培养表达重组蛋白的宿主细胞的方法和组合物，所述细胞培养基补充了包含有效量戊酸的补料，由此，相比不用含戊酸补料条件下生长的细胞，细胞活力提高且所述蛋白质的生产增加。

技术领域

本发明属于细胞培养领域。具体地说，本发明涉及在细胞培养基中培养表达重组蛋白的宿主细胞的方法，所述细胞培养基补充了包含有效量戊酸的补料，从而使得所述宿主细胞的活力和所述蛋白质的生产高于无戊酸补料培养的细胞。

背景技术

过去20年中，生物制药公司致力于寻找能够促进细胞生长和重组蛋白生产力的化合物。许多作者报道称小分子添加剂对比生产力有积极影响，通常是因为它们将细胞培养物阻留在G0期[1]，这正是对生产而言最重要的相期。其中，羧酸对于培养物的表现有最大影响。它们被发现抑制HDAC1活性(组蛋白去乙酰化酶1)[2]。但是，在培养过程中添加化合物，既便可能提高效价，通常会降低质量。这些化合物还会有细胞毒性和凋亡活性。因此，许多方案意图通过比较不同的羧酸并研究它们对于效价和质量的影响来寻找对蛋白质危害更低的添加剂。

所以，需要能够安全培养宿主细胞并增加重组蛋白生产的培养条件和生产方法。本发明为此提供了方法和组合物用于增加重组蛋白生产，同时改善宿主细胞活力。

发明概述

一方面，本发明提供一种增加重组蛋白生产的方法，所述方法包括在细胞培养基中培养表达所述蛋白的宿主细胞，所述细胞培养基补充了至少一份包含有效量戊酸的补料。

另一方面，本发明提供一种培养表达重组蛋白的宿主细胞的方法，所述方法包括在细胞培养基中培养所述宿主细胞，所述细胞培养基补充了至少一份包含有效量戊酸的补料。

另一方面，本发明提供一种补料组合物，其包含有效量的戊酸。

另一方面，本发明提供戊酸作为补料用于细胞培养来增加重组蛋白生产的用途。

另一方面，本发明提供戊酸作为诱导剂用于细胞培养的用途。

附图说明

图1显示用不同浓度戊酸、不同补料时机培养的表达蛋白P1的宿主细胞的活细胞密度(A)、活力(B)和效价(C)。图1A、1B和1C的图例如图1D中所述。

图2显示不同时机添加1.5mM戊酸来培养的表达抗体P2的宿主细胞的活细胞密度(A)、活力(B)和效价(C)。图2A、2B和2C的图例如图2D中所述。

两图中：VA＝戊酸，WD＝工作日(即向细胞培养物中加戊酸的日子)

发明详述

本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献都通过引用整体纳入。

除非另外定义，本文所用科技术语的含义与本文主题所属领域的技术人员通常理解的含义相同。按照本文中的使用，提供以下定义以便理解本发明。

“包含”一词在此普遍表示包括的意思，即允许存在一项或多项特征或组分。在本申请说明书和权利要求中，“包含”可包括用“由……构成或组成”和/或“主要由……构成或组成”之类描述的类似的实施方式。

在本申请说明书和权利要求中，“一(个)”、“一(项)”和“所述”等单数形式涵盖复数意义，除非文中明确另有所指。“和/或”用于“A和/或B”之类表述时意在涵盖“A和B”、“A或B”、“A”和“B”。

术语“细胞培养”或“培养”(含复数)指细胞体外(in vitro)生长和繁殖，即生物体或组织之外。适合哺乳动物细胞的培养条件是本领域周知的，例如《用于制药和细胞疗法的细胞培养技术》(Cell Culture Technology for Pharmaceutical and Cell-BasedTherapies)(2005)[3]中所授。哺乳动物细胞可悬浮培养或于固体基材上贴附培养。