[发明专利]对用两亲强碱性部分改性的聚糖进行电喷雾电离的方法

说明书

本发明提供了对用两亲强碱性部分改性的聚糖进行电喷雾电离的溶液、检测方法和色谱系统。用于电喷雾电离的所述溶液包含具有两亲部分、pKa>5的碱性残基和1与3之间的Log P值的多种聚糖以及选自胺、氨、氨盐、二乙胺或三甲胺的一种或多种挥发性组分。所述溶液还具有约3至约6之间的pH以及约0mM至约500mM之间的离子强度。所述溶液可用于在电喷雾电离中及在各种色谱系统中检测改性的聚糖。

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年6月21日提交的美国临时专利申请No.62/352,755的优先权，该申请以引用方式并入本文。

背景技术

当受到电喷雾电离时，甲酸基流动相中的标记的聚糖易于经由源内断裂而降解，即使当采用相对温和的质谱源条件且聚糖用强碱性残基进行改性时也是如此。因此需要获得对这些标记的聚糖的更高灵敏度、更少含糊性的MS分析。

发明内容

本文提供了对已用两亲强碱性部分改性的聚糖进行电喷雾电离的溶液、方法和系统。用于电喷雾电离的溶液包含具有两亲部分和pKa>5的碱性残基的多种聚糖以及选自胺、氨、氨盐、二乙胺或三甲胺的一种或多种挥发性组分。在一个实施方案中，该溶液具有约3至约6之间的pH以及约0mM至约500mM之间的离子强度。在一个实施方案中，该溶液还可包含溶剂。在一个实施方案中，该溶剂可为乙腈、甲醇、四氢呋喃、乙醇或异丙醇。此外，在一个实施方案中，该聚糖用两亲强碱性部分进行改性，该两亲强碱性部分具有约1与约3之间的Log P值。在一个实施方案中，该两亲强碱性部分具有大于6的pKa值。在一个实施方案中，该碱性残基为叔胺。在一个实施方案中，该聚糖的两亲部分由RFMS赋予。在一个实施方案中，这些聚糖可为O-聚糖或N-聚糖。

另外，本文提供了用于聚糖分析的色谱系统，这些色谱系统包括溶液，该溶液具有经改性而包含两亲部分和pKa>5的碱性残基的多种聚糖以及选自胺、氨、氨盐、二乙胺或三甲胺的一种或多种挥发性组分；以及含疏水性固定相的色谱装置。在一个实施方案中，该溶液具有约3至约6之间的pH以及约0mM至约500mM之间的离子强度。在一个实施方案中，该色谱系统具有反相保留机制。在一个实施方案中，该色谱装置是反相色谱与混合模式反相色谱的组合。在一个实施方案中，这些聚糖可为O-聚糖或N-聚糖。

本文还提供了检测聚糖的方法，所述方法包括以下步骤：(1)提供具有聚糖的样品；(2)在该样品中形成衍生化的聚糖，其中该聚糖经改性而包含两亲部分和pKa大于5的碱性残基；(3)在色谱装置中及在包含选自胺、氨、氨盐、二乙胺或三甲胺的一种或多种挥发性组分的溶液中分离衍生化的聚糖，该溶液具有约3至约6之间的pH以及约0mM至约500mM之间的离子强度；以及(4)使用电喷雾电离来检测分离的衍生化的聚糖。在一个实施方案中，这些聚糖可为O-聚糖或N-聚糖。

附图说明

图1示出了用两亲强碱性部分改性的聚糖的示例性化学结构。

图2示出了用两亲强碱性部分改性的聚糖的又一个示例性化学结构。

图3A是从包含0.1％甲酸/20％乙腈的溶液电喷雾时RFMS标记的FA2G2聚糖的ESI质谱。

图3B是从包含大约20:80乙腈和50mM甲酸铵(pH为4.4)的溶液电喷雾时标记的FA2G2聚糖的ESI质谱。

图3C是从包含0.1％甲酸/20％乙腈的强酸性ESI+条件电喷雾且由用pH 3与pH 6之间的挥发性铵盐缓冲的溶液加以稳定时2-AB标记的FA2G2聚糖的ESI质谱。

图3D是从包含大约20:80乙腈和50mM甲酸铵(pH为4.4)的溶液电喷雾时2-AB标记的FA2G2聚糖的ESI质谱。

具体实施方式