[发明专利]脂蛋白输出信号及其用途

权利要求书

1.一种多肽前体，其包含

(a)革兰氏阴性细菌的脂蛋白的N-末端信号肽，其包含位于所述信号肽的C-末端的最末端的脂盒基序，其中所述脂盒基序由氨基酸序列L(S/A)(A/G)C组成并且可被II型信号肽酶特异性识别；

(b)脂蛋白输出信号，其包含根据以下共有序列中的任一个的氨基酸序列：

-XJZZ，其中X可以是任何氨基酸，其中J选自由K和A组成的组，其中Z选自由D和E组成的组，条件是当J是A时，X是Q；

-BZZUZ，其中B选自由S和T组成的组，其中Z选自由D和E组成的组，并且其中U选自由D、E和F组成的组；或者

-XKEOEE，其中X和O可以是任何氨基酸，优选其中O是V；

其中所述脂蛋白输出信号是总体上带负电的，并且其中所述脂蛋白输出信号位于直接邻接于所述信号肽的C-末端；

(c)多肽，其中所述多肽位于所述信号肽和所述脂蛋白输出信号的C-末端；以及

(d)任选地，蛋白酶切割位点基序，其中所述蛋白酶切割位点基序不同于所述脂盒基序并且位于所述信号肽和所述脂蛋白输出信号的C-末端以及所述多肽的N-末端；

其中所述信号肽、所述脂蛋白输出信号和所述多肽不天然共同存在于多肽序列中。

2.根据权利要求1所述的多肽前体，其中革兰氏阴性细菌的脂蛋白的所述N-末端信号肽是狗咬二氧化碳嗜纤维菌5(C.canimorsus 5)的唾液酸酶(siaC)或粘蛋白酶(MucG)的信号肽。

3.根据权利要求1或2所述的多肽前体，其中所述脂蛋白输出信号选自根据以下的氨基酸序列

-SEQ ID NO：16至SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：40至47中的任一个；

-SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：25至39中的任一个；或

-SEQ ID NO：49至SEQ ID NO：51或SEQ ID NO：63中的任一个。

4.一种核酸，其编码根据权利要求1至3中任一项所述的多肽前体。

5.一种重组表达载体，其包含根据权利要求4所述的核酸、启动子和转录和翻译终止信号，以及任选的选择标记。

6.一种重组表达载体，其包含

(a)编码革兰氏阴性细菌的脂蛋白的信号肽的核酸序列，其中所述信号肽包含位于所述信号肽的C-末端的最末端的脂盒基序，其中所述脂盒基序由氨基酸序列L(S/A)(A/G)C组成并且被II型信号肽酶特异性识别；

(b)编码脂蛋白输出信号的核酸序列，所述脂蛋白输出信号具有根据以下共有序列中的任一个的氨基酸序列：

-XJZZ，其中X可以是任何氨基酸，其中J选自由K和A组成的组，其中Z选自由D和E组成的组；条件是当J是A时，X是Q；

-BZZUZ，其中B选自由S和T组成的组，其中Z选自由D和E组成的组，并且其中U选自由D、E和F组成的组；或者

-XKEOEE，其中X和O可以是任何氨基酸，优选其中O是V；

其中所述脂蛋白输出信号是总体上带负电的，并且其中编码所述脂蛋白输出信号的所述核酸序列直接位于编码所述信号肽的所述核酸序列的下游；

(c)任选地，编码蛋白酶切割位点基序的核酸序列，其中所述蛋白酶切割位点基序不同于所述脂盒基序并且位于编码所述脂蛋白输出信号的所述核酸序列和编码所述信号肽的所述核酸序列的下游；以及

(d)多克隆位点，其中所述多克隆位点位于编码所述脂蛋白输出信号的所述核酸和编码所述信号肽的所述核酸的下游，并且任选地位于所述蛋白酶切割位点基序的下游。

7.根据权利要求6所述的重组表达载体，其中革兰氏阴性细菌的脂蛋白的所述N-末端信号肽是狗咬二氧化碳嗜纤维菌5(C.canimorsus 5)的唾液酸酶(siaC)或粘蛋白酶(MucG)的信号肽。