[发明专利]酵母中RAS/CAMP/PKA信号通路的调节

权利要求书

1.一种使发酵培养基发酵从而获得发酵产物的方法，所述方法包括：

(i)可选地在繁殖培养基中繁殖第一酵母细胞和/或第二重组酵母宿主细胞从而获得酵母细胞的繁殖群体；和

(ii)在允许产生所述发酵产物的条件下使所述第一酵母细胞，所述第二重组酵母宿主细胞和/或所述繁殖群体与所述发酵培养基接触；

其中：

·所述第一酵母细胞选择为能够在RAS/cAMP/PKA途径中表现出增加的信号；

·所述第二重组酵母宿主细胞包含对能够增加所述RAS/cAMP/PKA途径中的信号的异源蛋白进行编码的异源核酸分子；和

·所述繁殖群体包含所述第一酵母细胞或所述第二重组酵母宿主细胞中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的方法，包括使所述第一酵母细胞或包含所述第一酵母细胞的繁殖群体与所述繁殖培养基接触。

3.根据权利要求1或2所述的方法，进一步包括在繁殖步骤和/或接触步骤之前或期间，从酵母细胞群体中选择出所述第一酵母细胞。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，进一步包括在繁殖步骤和/或接触步骤之前或期间，从所述繁殖培养基和/或所述发酵培养基中排除或去除缺乏在所述RAS/cAMP/PKA途径中表现出增加的信号的能力的酵母细胞。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中所述第一酵母细胞选择或已经选择为与野生型Ras2蛋白相比能够表达具有增加的活性的突变Ras2蛋白。

6.根据权利要求5所述的方法，其中与所述野生型Ras2蛋白相比，所述突变Ras2蛋白包含至少一个氨基酸残基变异。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述突变Ras2蛋白具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列或由具有SEQ ID NO：3的序列的核酸分子进行编码。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中所述第一酵母细胞选择或已经选择为与野生型Ira2蛋白相比能够表达对于野生型Ras1和/或野生型Ras2蛋白具有降低的抑制活性的突变Ira2蛋白。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述突变Ira2蛋白是野生型Ira2蛋白的片段。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述突变Ira2蛋白具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列或由具有SEQ ID NO：7的序列的核酸分子进行编码。

11.根据权利要求1～10中任一项所述的方法，包括使所述第二重组酵母宿主细胞或包含所述第二重组酵母宿主细胞的繁殖群体与所述繁殖培养基接触。

12.根据权利要求1～11中任一项所述的方法，其中所述异源核酸分子包含对与野生型Ras2蛋白相比具有增加的活性的突变Ras2蛋白进行编码的第一核酸分子。

13.根据权利要求12所述的方法，其中与所述野生型Ras2蛋白相比，所述突变Ras2蛋白包括至少一个氨基酸残基变异。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述突变Ras2蛋白具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列或由具有SEQ ID NO：3的序列的核酸分子进行编码。

15.根据权利要求1～14中任一项所述的方法，其中所述异源核酸分子包含对与野生型Ira2蛋白相比对于野生型Ras1蛋白和/或野生型Ras2蛋白具有降低的抑制活性的突变Ira2蛋白进行编码的第二核酸分子。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述突变Ira2蛋白是所述野生型Ira2蛋白的片段。