[发明专利]整合的细胞

权利要求书

1.一种培养真核细胞的方法，包括以下步骤：

(a)提供能够组装成水不溶性宏观结构的丝蛋白的含水溶液，其中所述丝蛋白是蜘蛛丝蛋白；

(b)制备所述真核细胞的样品与所述丝蛋白的含水混合物，其中所述丝蛋白在所述含水混合物中保持为可溶的；

(c)使所述丝蛋白在所述真核细胞存在下组装成水不溶性宏观结构，从而形成用于培养所述真核细胞的支架材料；和

(d)在适于细胞培养的条件下将所述真核细胞维持在所述支架材料内，

其中，使所述宏观结构成为选自纤维、泡沫和膜的形状。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述真核细胞选自哺乳动物细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述真核细胞选自原代细胞和细胞系和干细胞；或至少两种不同哺乳动物细胞类型的组合。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述真核细胞选自内皮细胞、成纤维细胞、角质形成细胞、骨骼肌卫星细胞、骨骼肌成肌细胞、许旺氏细胞、胰腺β细胞、胰岛细胞、肝细胞、胶质瘤形成细胞和间充质干细胞。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述蜘蛛丝蛋白包含或由以下组成：蛋白部分REP和CT，其中

REP是70至300个氨基酸残基的重复片段，选自由L(AG)_nL、L(AG)_nAL、L(GA)_nL和L(GA)_nGL组成的组，其中

n是2到10的整数；

每个单独A区段是8至18个氨基酸残基的氨基酸序列，其中所述氨基酸残基中的0至3个不为Ala，并且剩余的氨基酸残基是Ala；

每个单独G区段是12至30个氨基酸残基的氨基酸序列，其中所述氨基酸残基中的至少40％是Gly；并且

每个单独L区段是0至30个氨基酸残基的接头氨基酸序列；并且

CT是70至120个氨基酸残基的片段，与SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：68具有至少70％的同一性。

6.根据权利要求1-5中任一项的方法，其中所述丝蛋白含有细胞结合基序。

7.根据权利要求1-5中任一项的方法，其中所述丝蛋白含有选自RGD、IKVAV(SEQ IDNO：10)、YIGSR(SEQ ID NO：11)、EPDIM(SEQ ID NO：12)、NKDIL(SEQ ID NO：13)、GRKRK(SEQID NO：14)、KYGAASIKVAVSADR(SEQ ID NO：15)、NGEPRGDTYRAY(SEQ ID NO：16)、PQVTRGDVFTM(SEQ ID NO：17)、AVTGRGDSPASS(SEQ ID NO：18)、TGRGDSPA(SEQ ID NO：19)、CTGRGDSPAC(SEQ ID NO：20)和FN_cc(SEQ ID NO：9)的细胞结合基序；

其中FN_cc是C¹X¹X²RGDX³X⁴X⁵C²；

其中X¹、X²、X³、X⁴和X⁵各自独立地选自半胱氨酸以外的天然氨基酸残基；并且C¹和C²经由二硫键连接。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中步骤(b)的所述含水混合物还包含细胞结合蛋白或多肽。

9.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中步骤(b)的所述含水混合物还包含层粘连蛋白。