[实用新型]一种人p16蛋白的检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于医疗器械领域，涉及一种人p16蛋白的检测试剂盒。

背景技术

p16抑癌基因位于人类染色体9p21短臂上，属于INK4类细胞周期抑制因子的成员之一。p16蛋白能结合细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和6(CDK6)，并维持视网膜母细胞瘤基因产物pRb蛋白持续处于低磷酸化高活性状态。pRb则能结合E2F转录因子并阻止G1期进入S期的细胞周期进程。p16蛋白在衰老细胞中的表达有所增加。p16蛋白过表达在这种情况下会最终可促进细胞的死亡和凋亡。在大多数非人乳头瘤病毒(HPV)感染相关的肿瘤，包括结肠癌、乳腺、胰腺、黑素瘤和与吸烟密切相关的头颈部癌中，p16基因都出现了缺失、突变或表观遗传沉默而导致丧失功能。因此，p16蛋白免疫组化检测在这些肿瘤中的结果通常是阴性的。

而在HPV感染相关的肿瘤中则截然相反。HPV病毒感染后整合入宿主细胞基因组中，导致E6和E7病毒癌蛋白的产生。E6能降解p53并防止细胞凋亡。E7则功能性地灭活pRb，从而阻止pRb结合E2F转录因子。pRb作为正反馈回路的关键一环，反过来导致p16在细胞核和细胞质中的表达量增加，结果能通过p16蛋白免疫组化实验检测到。最近的研究表明，转录活性高的HPV可导致非常高水平的p16表达。低风险HPV病毒编码的E7蛋白在某些生物化学和生物学性质方面均不同于高风险HPV编码的，结果是在感染低风险HPV病毒的细胞中未观察到p16蛋白积累表达。鉴于以上的结果，通过免疫组化检测到的p16蛋白过表达可以作为鉴定肿瘤中高危HPV感染的敏感标记。然而，研究表明p16也在许多其他癌症中表达，例如脂肪肉瘤、胃腺癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、肺腺癌、神经内分泌癌和非HPV感染机制导致的子宫癌等。基因缺失、点突变、功能突变或者Rb通路失调导致pRb的失活是这些非HPV感染肿瘤高表达p16蛋白的主要原因。所以，用免疫组化技术检测p16表达对于诊断以上癌症具有重要的参考意义。

免疫组织化学是利用抗体能特异性结合抗原的特性，再通过抗体上标记物的显色，来检测或者定位组织或细胞中的某种蛋白质物质的技术。但是，常规的免疫组织化学技术实验耗时长，整个实验至少需要数小时才能完成，导致用免疫组化技术检测p16表达不能及时、快速、有效地得到结果，阻碍了其诊断癌症的临床应用。

目前，人p16蛋白的快速检测试剂盒尚未见有相关专利，制备一个能够对人p16蛋白进行快速检测的试剂盒就显得尤为重要。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种人p16蛋白的检测试剂盒，该试剂盒检测时间短，并能提供准确的检测结果。

为达到此实用新型目的，本实用新型采用以下技术方案：

一方面，本实用新型提供一种人p16蛋白的检测试剂盒，包括盒体以及与盒体相连的翻盖式盒盖，所述盒体内具有放置试剂瓶的凹槽和位于下凹槽上的试剂瓶，所述盒内设有8个试剂瓶和1个粉状试剂槽1，所述8个试剂瓶从盒体的左侧面到右侧面分为三列，其中，位于左侧面的一列包含3个试剂瓶，位于右侧面的一列包含3个试剂瓶，位于中间的一列包含2个试剂瓶，所述粉状试剂槽1固定于盒体内的后侧面。

本实用新型中，与盒盖相连的侧面记为后侧面，与所述后侧面相对的侧面为前侧门，所述前侧门左边的侧面为左侧面，所述前侧门右边的侧面为右侧面。

优选地，所述位于左侧面的一列从前到后依次为即用型抗p16蛋白一抗试剂的试剂瓶4、即用型封闭液的试剂瓶3和即用型过氧化物酶抑制剂的试剂瓶2。

本实用新型中，所述“即用型”为可以无需稀释或调整配比，直接用于检测的试剂。

优选地，所述位于右侧面的一列从前到后依次为即用型苏木素染色液的试剂瓶7、即用型HRP标记的二抗试剂的试剂瓶6和反应增强液的试剂瓶5。

本实用新型中，所述“HRP”为辣根过氧化物酶。

优选地，所述位于中间的一列从前到后依次为DAB浓缩液的试剂瓶8和DAB稀释液的试剂瓶9。

本实用新型中，所述“DAB”为二氨基联苯胺。

优选地，所述即用型抗p16蛋白一抗试剂的试剂瓶4、即用型封闭液的试剂瓶3、即用型过氧化物酶抑制剂的试剂瓶2、即用型苏木素染色液的试剂瓶7、即用型HRP标记的二抗试剂的试剂瓶6、反应增强液的试剂瓶5和DAB浓缩液的试剂瓶8的容积为1ml。

优选地，所述DAB稀释液的试剂瓶9容积为5ml。

优选地，所述粉状试剂槽1用于放置PBS粉剂。

所述部分试剂可通过以下方法制备得到：