[发明专利]苍白密螺旋体三联抗原

说明书

本发明公开了苍白密螺旋体三联抗原构建体，其包括三种苍白密螺旋体抗原(TP15、TP17和TP47)，以及十氨基酸前导序列(标签261)和人铜锌超氧化物歧化酶(hSOD)。这种构建体对于梅毒感染的体外诊断是最佳化的。本发明还公开了含有编码三联抗原的DNA的质粒、宿主细胞、生产方法、检测方法和试剂盒。

本申请是发明名称与母案相同的分案申请，母案的中国申请号是201280005276.8，国际申请号是PCT/US2012/021323，申请日是2012年1月13日。

相关专利申请的交叉引用

本专利申请要求于2011年1月13日提交的美国临时申请号61/432,570的利益。

关于联邦资助的研究或开发的声明

不适用。

技术领域

本发明涉及重组抗原领域，并且更具体而言，涉及苍白密螺旋体(Treponemapallidum)三联抗原构建体及其在用于检测梅毒的免疫测定法中的用途。

背景技术

经过过去五十年，有效抗生素治疗计划已使得梅毒在美国相对不常见，在2003年诊断有小于7，100例原发性和继发性病例。然而，近期数据指出报道的病例再次在人口亚群中渐增，并且梅毒的周期性流行已发生数十年。在1995年，全世界梅毒新病例数目估计为每年一千二百万例。如果未治疗，则梅毒可从局限性原发性病灶(下疳)进化为弥散性、慢性感染，包括继发性、潜伏性和三期形式。

因为梅毒感染可在人中产生可变范围的症状，所以通常需要实验室测试以确定诊断感染。由于不能在体外培养成因生物体，苍白密螺旋体(T.pallidum)(TP)，存在用于检测不同临床样本中的苍白密螺旋体的体外方法的开发和优化的需要[Morse，Salud PublicaMex 5(增刊45)：S698-S708，2003]。虽然用于密螺旋体属(Treponema)的酶联免疫吸附测定法(ELISAs)是可商购获得的，但它们表现出在不同疾病阶段的不同效率。[Schmidt等人，JClin Microbiol《临床微生物学杂志》38：1279-1282(2000)]。开发了基于全细胞裂解物的ELISAs，其呈现出93.3％至100％的灵敏度和95.5％至99.8％的特异性。[Castro等人，JClin Microbiol《临床微生物学杂志》41：250-253(2003)]。

近年来，苍白密螺旋体的几种免疫显性和假定的病原体特异性膜脂蛋白已在具有梅毒的患者和具有先天性梅毒的婴儿中得到鉴定。这些患者和婴儿发展可通过免疫印迹和酶免疫测定法进行检测的抗原特异性抗体。因此，近期检测方法在密螺旋体ELISA测试中使用重组抗原，即膜整合蛋白质47kDa、17kDa和15kDa(分别为TP47、TP17和TP15)。尽管TP47最早得到鉴定，并且是最丰富和高度免疫原性的[Norgard等人，Infect Immun《传染与免疫》54：500-506(1986)]，但后来鉴定的以更低量存在的TP15和TP17也是强免疫原性的[Purcell等人，Infect Immun《传染与免疫》57：3708-3714(1989)；Akins等人，InfectImmun《传染与免疫》61：1202-1210(1993)]。

考虑到梅毒报道案例的增加和周期性流行，以及该疾病的严重性，继续存在用于检测苍白密螺旋体的灵敏和特异的免疫测定法的需要。

发明内容

为此，本发明提供了编码苍白密螺旋体三联抗原的重组质粒。所述质粒包含编码选自SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12的氨基酸序列的核酸。