[发明专利]一种利拉鲁肽的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽药物合成领域，特别涉及GLP-1受体激动素一种利拉鲁肽的合成方法。

背景技术

利拉鲁肽，英文名：Liraglutide。

肽序列为：

H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln- Ala-Ala-Lys(Pal-γ-Glu)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH

利拉鲁肽由丹麦诺和诺德公司开发的第一个长效GLP-1类似物，与人胰高糖素样肽-1（GLP-1）同源性达97%。利拉鲁肽具有降低血糖，促进胰岛细胞再生，轻微延长胃排空等多种作用，应用前景广泛。

CN 103304660的专利文献公开了一种利拉鲁肽的合成方法，固相合成N端保护的利拉鲁肽直链肽，然后合成十六烷基衍生物，脱保护除去末端保护，得到目标多肽。该方法采用氨基酸逐个偶联的方式，随着直链肽的延长，大量的疏水性保护基团加剧了分子间的缔合作用，部分活性基团被包裹其中，工艺中产生不易除去的缺陷肽，增加投料和延长时间无法根本上解决问题。

CN 102875665的专利文献公开了一种合成利拉鲁肽的方法，将利拉鲁肽分成5个片段，先合成第 1 至第 4氨基酸、第 5 至第 10 氨基酸、第 11 至第 16 氨基酸、第17至第 24 氨基酸以及第25 至第 31氨基酸，然后5个多肽片段对接合成利拉鲁肽，缩短合成周期。虽然该方法可以同时偶联5个片段，但是5个片段均需要大量的树脂，大大提高了生产成本，并且多次的裂解在产业化增加大量的操作步骤，同时也产生过多的废液。

因此，本领域迫切需要提供一种利拉鲁肽的合成方法，以解决现有利拉鲁肽合成过程中存在的杂质多，纯度和收率低，成本昂贵，操作步骤繁琐，废液过量的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有合成过程中所存在的杂质多，纯度和收率低，成本昂贵，操作步骤繁琐，废液过量，不利于工业化生产的问题，提供一种新的、利拉鲁肽的合成方法。

本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种利拉鲁肽的合成方法，其特点是，其步骤如下：

(1) 固相合成利拉鲁肽序列的第1-4位氨基酸作为第一片段，

(2) 固相合成利拉鲁肽序列的第5-31位氨基酸，脱除20位Lys 的侧链保护基团并偶联Pal-γ-Glu-Otbu，作为第二片段；

(3) 第一片段与第二片段液相偶联，合成全保护利拉鲁肽，经裂解沉淀，得到利拉鲁肽。

步骤(1)中，第一片段与第二片段所用的树脂优选为2- CTC树脂。

步骤(2)中，第二片段中20位Lys的侧链保护基团优选为催化氢化脱除的Alloc。

步骤(1) (2)中，合成第一片段与第二片段的所用的缩合剂优选为DIC/HOBt，HBTU/HOBT/DIEA，PyBop/HOBT/DIEA其中的一种或多种；所用的反应溶剂优选为DCM、DMF、NMP、DMSO中的一种或多种组合；所使用的Fmoc脱除试剂优选为v/v20%哌啶/DMF溶液。

步骤(1) (2)中，第一片段与第二片段全保护裂解试剂优选为v/v15%～25%（最优选20%）TFE/DCM或v/v0.05%～0.15%（最优选0.1%）TFA/DCM。最优选为v/v15%～25%（最优选20%）TFE/DCM。

步骤(3)中第一片段与第二片段液相偶联采用的缩合剂优选为DCC/HOSu组合或EDC·HCl/HOSU组合。最优选为DCC/HOSu组合

步骤(3)采用的裂解试剂优选为TFA:Thioanisole:Anisole:EDT=90:4～6:2～4:1～3，最优选为TFA:Thioanisole:Anisole:EDT＝90:5:3:2。

本发明所述的一种利拉鲁肽的合成方法，其进一步优选的技术方案步骤如下（下述技术方案中，各原料的量可以按照需要适当取用）：

（1）Fmoc-Gly-2-CTC树脂的制备：

2-CTC树脂加入到固相反应器中，加入适量 DCM溶胀树脂；抽干溶剂，加入Fmoc-Gly-OH，DIEA，DMF溶液，搅拌反应；抽干溶剂，加入甲醇/DCM溶液，封闭；DCM与甲醇交替洗涤若干次；真空干燥后，得到Fmoc-Gly-2-CTC树脂；

（2）多肽片段1的制备：