[发明专利]检测血液中苯妥英钠药物含量的液相色谱分析方法

说明书

本发明检测血液中苯妥英钠药物浓度的方法是使用液相色谱分析仪器和紫外检测器对标准溶液进行标定，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，取待测血液样品，在该待检测血液经过处理后，同样使用液相色谱分析仪器和紫外检测器对待测的样品进行检测，得到待测血液y值，将待测血液y代入标准曲线方程中，通过计算得到待测血液样品中目标物相对浓度x，内标物工作液浓度是已知的，由此计算得到该样本中待检测血液中的苯妥英钠药物浓度，该方法提高了定量结果的准确性，极大地缩短分析时间，使检测过程简便快速，更利于在临床治疗中对患者体内的苯妥英钠血药浓度进行监测，为抗癫痫药物苯妥英钠的个性化给药、减少毒副反应的发生提供实验基础。

技术领域

本发明涉及精神类药物的临床血药浓度监测技术领域，尤其涉及一种检测血液中苯妥英钠药物浓度的方法。

背景技术

苯妥英钠(Phenytoin Sodium)是临床一线常用的有效抗癫痫药物之一，适用于治疗癫痫全面强直阵挛性发作、单纯及复杂部分性发作、继发性全面性发作和癫痫持续状态，分子式为C15H11N2NaO2，具体结构式如图1所示。苯妥英钠作为成人癫痫的首选药物，治疗指数低、安全范围窄、个体差异大，在临床上若剂量和用法不当，可导致疗效不佳或者出现严重毒副作用，因此对苯妥英钠进行血药浓度监测及个体用药十分有必要。

目前已报道测定苯妥英钠血药浓度的检测方法主要包括荧光偏振免疫法、酶联免疫吸附法、紫外分光光度法、液相色谱质谱联用法、高效液相色谱法等，其中，免疫法所用进口试剂价格昂贵，且所用试剂盒专属性稍差；紫外分光光度法前处理操作复杂，耗时耗力，难以对大量样本进行分析；液相色谱质谱联用法分析成本较高，对人员及场地要求高，不适于在中小型医院广泛开展；高效液相色谱法具有准确灵敏、专属性强、重现性好、成本低等优点，已成为测定苯妥英钠血药浓度的主要方法。但目前已使用的高效液相色谱法前处理操作较复杂，外标法定量重现性差，此外，还存在分析时间较长，消耗有机溶剂较多等问题。

发明内容

针对上述技术问题，本发明目的是提供一种检测血液中苯妥英钠药物浓度的方法，将内标法与高效液相色谱法相结合，使苯妥英钠血药浓度的测定快速准确，并通过使用双泵的柱切换技术，很大程度上缩短样品分析时间，且在分析中溶剂流速很低，减少了有机溶剂的使用，利于环保。

本发明采用以下技术方案：

本发明的检测血液中苯妥英钠药物含量的液相色谱分析方法，其中：它包括以下步骤：

(一)标准溶液的标定

首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL分别与10μL内标工作液和80ul甲醇混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀1-5min后，使用液相色谱分析仪器和紫外检测器对上述标准溶液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的苯妥英钠和内标色谱图，在上述苯妥英钠和内标色谱图中分别得到标准目标物峰面积与内标物峰面积，以上述至少三个标准目标物峰面积与内标物峰面积的比值作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液浓度与内标工作液浓度的比值即相对浓度为作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为苯妥英钠溶液，所述内标工作液为环庚米特溶液；

(a)标准工作液的配制：

精确称取苯妥英钠标准品20mg置于10ml容量瓶，用含水量为0％-25％的甲醇溶液进行溶解，并定容于10ml，得到标准储备液A，将标准储备液A用含水量为25％-60％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有25-400μg/mL苯妥英钠的范围内配置出各标准工作液，并在-80℃条件下保存；

(b)内标工作液的配制：