[发明专利]一种黄体酮的磁免疫化学发光检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种黄体酮的磁免疫化学发光检测试剂盒，它包括：酶标抗原、酶标抗原稀释液、磁标抗体、磁标抗体稀释液、黄体酮系列标准品溶液、化学发光底物A液、化学发光底物B液、复溶液、洗涤液，其中酶标抗原是辣根过氧化物酶标记的黄体酮半抗原，磁标抗体是免疫磁珠标记的黄体酮单克隆抗体。本发明还公开了一种利用上述试剂盒配套化学发光检测仪检测牛奶中黄体酮残留量的方法，本方法对黄体酮检测具有较高的灵敏度、特异性和较短的检测时间。

技术领域

本发明涉及一种化学发光检测试剂盒及其检测方法，特别是检测牛奶中黄体酮残留量的磁免疫化学发光检测试剂盒，属于免疫学检测领域。

背景技术

黄体酮(progesterone)，又名孕酮，是由卵巢黄体分泌的一种天然孕激素，在体内对雌激素激发过的子宫内膜有显著形态学影响，为维持妊娠所必需，生理效应及临床治疗作用广泛，应用历史悠久。孕酮具有促进雌性动物性器官成熟及第二性征出现的作用，并维持生殖功能，孕激素往往在雌激素作用基础上产生效用，以喂养奶牛为例，孕激素可以增强食欲、提高饲料转化率和提高牛奶产量，因此孕激素可以产生显著的经济效益，对畜牧业生产者有很大的吸引力。但国际上已公认，孕酮在食品中的残留有可能增加人类乳腺癌、卵巢癌以及子宫内膜癌发病率，所以奶制品中黄体酮的检测显得尤为重要。

目前，激素类物质常用的测定方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱法和液相色谱-质谱法，由于以上诸分析法样品前处理比较复杂，操作时需专门的技术人员、检测费用昂贵，不利于推广应用，因此亟需便携、高灵敏度的快速检测产品的出现。免疫检测方法是以抗原、抗体的特异性反应为基本原理建立起来的快速分析方法，由于抗原、抗体的结合具有高选择性和灵敏性，使得这一技术在药物残留检测领域得到广泛的应用。目前，最常用的免疫检测方法包括酶联免疫检测法和胶体金免疫层析检测法，但由于灵敏度较低，假阴性率和假阳性率较高，逐渐被灵敏度高、准确度高、检测时间短的化学发光免疫检测方法所替代。磁免疫化学发光检测试剂配套磁免疫化学发光检测仪检测动物源性产品中黄体酮的残留，实现检测过程的全自动化，减少人为操作误差，灵敏度高，准确度高，检测成本低，适用于大批量样品中黄体酮残留量的筛查。

发明内容

本发明的目的在于提供一种黄体酮检测试剂盒，采用该试剂盒进行黄体酮残留量检测时，具有较高的灵敏度、特异性和准确度。

本发明的另一个目的在于提供一种检测黄体酮的方法，采用试剂盒配套化学发光检测仪进行黄体酮残留量检测时，不仅具有较高的灵敏度、特异性和准确度，而且实现了全自动化检测，缩短检测时间，减少人为操作误差。

本发明试剂盒，它包括：酶标抗原、酶标抗原稀释液、磁标抗体、磁标抗体稀释液、黄体酮系列标准品溶液、化学发光底物A液、化学发光底物B液、复溶液、洗涤液。

所述酶标抗原是辣根过氧化物酶标记的黄体酮半抗原，所述磁标抗体是免疫磁珠标记的黄体酮单克隆抗体，所述黄体酮单克隆抗体是由黄体酮半抗原与牛血清白蛋白偶联得到的偶联物作为免疫原免疫动物制备获得；所述黄体酮半抗原是16,17-环氧黄体酮与巯基丙酸反应得到，其分子结构式为：

所述免疫磁珠表面含有—OH、—COOH或—NH₂活性基团。

所述化学发光底物A液为含有鲁米诺和对甲苯酚的三羟甲基氨基甲烷溶液，化学发光底物B液为含有柠檬酸、无水Na₂HPO₄和CO(NH₂)₂·H₂O₂的水溶液。

所述黄体酮系列标准品溶液浓度分别为0μg/L、0.1μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L。