[发明专利]细胞保存方法和细胞运输方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，提供了一种保存活细胞的细胞保存方法和细胞运输方法，具体地，涉及一种在维持细胞功能的状态下结合细胞保存液保存活细胞的细胞保存方法和细胞运输方法。本发明所述的细胞保存方法的方式是使用具有多个微空间的细胞培养器并结合细胞保存液来保护活细胞的细胞保存方法，使活细胞粘附在上述多个微空间的表面来进行培养，在上述培养后，将含有8％～20％HES(羟乙基淀粉)、50mg/L～150mg/L链霉素、10％～30％DMSO(二甲基亚砜)细胞保存液的培养基向上述细胞培养器注入，以覆盖上述多个微空间，将上述细胞培养容器密封，以使培养基不漏出，进行保存，能够以维持功能的状态保存活细胞。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种保存活细胞的细胞保存方法和细胞运输方法。

背景技术

血液、稀少细胞以及生物体组织等的保存中，通常采用传统的慢速冷却低温保存法，即“两步法”进行保存。特别是骨髓细胞、造血干细胞、间充质干细胞等稀少细胞，这些细胞在临床治疗中具有相当有益的效果，需要对其进行长期保存的技术。在这种低温度下的保存中，通常将上述血液、稀少细胞以及生物体组织等装入收装这些物质的容器中，然后密封在液氮内保存。但受冷却速率的影响，会对保存的细胞或组织造成损伤。若降温速率过快，则形成胞内冰，这些胞内冰在复温过程中会发生再结晶使细胞受损；若降温速率过慢，则细胞收缩过剧，并且细胞处在高浓度溶液中也会引起损伤。

在组织细胞的培养中，由于使用的用于细胞培养试验的细胞培养株，要求其表现与在生物体内的试验，即所谓体内(in vivo)试验同样的药物感受性、毒性反应，需要在细胞培养容器的表面能够构筑有规则性地排列的细胞间网络。另外，由于在细胞培养试验中使用的细胞培养株极为昂贵，因此期望提高细胞的生存率和增殖速度。

为了解决上述两个问题，本发明提供了一种在维持细胞功能的状态下结合细胞保存液保存活细胞的细胞保存方法和细胞运输方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种在维持细胞功能的状态下结合细胞保存液保存活细胞的细胞保存方法和细胞运输方法，可以解决现有细胞保存液受冷却速率影响的问题，同时也能解决在细胞培养试验中期望提高细胞生存率和增殖速度的问题。

本发明的一个方面提供了一种使用具有多个微空间的细胞培养器并结合细胞保存液来保护活细胞的细胞保存方法，使活细胞粘附在上述多个微空间的表面来进行培养，在上述培养后，将含有8％～20％HES(羟乙基淀粉)、50mg/L～150mg/L链霉素、10％～30％DMSO(二甲基亚砜)细胞保存液的培养基向上述细胞培养器注入，以覆盖上述多个微空间，将上述细胞培养容器密封，以使培养基不漏出，进行保存。在微空间的表面粘附活细胞，使用适于培养的微空间进行培养，在各微容器内形成三维结构体，利用微容器隔离三维结构体后，并结合细胞保存液进行密封并保存，更能够以维持功能的状态保存活细胞。

在另一优选例中，所述细胞培养容器置于4℃～37℃温度条件下来保存上述活细胞。优选地，所述培养温度为10℃～20℃。

在另一优选例中，所述细胞保存液中HES的浓度为8％～10％；在具体的实施方式中，所述培养基中的HES的浓度为10％。

在另一优选例中，所述细胞保存液中链霉素的浓度为50mg/L～100mg/L；在具体的实施方式中，所述链霉素的浓度为80mg/L。

在另一优选例中，所述细胞保存液中DMSO的浓度为10％～20％；在具体的实施方式中，所述DMSO的浓度为10％。

在另一优选例中，所述多个微空间优选底部面积为0.02～0.15mm2、深度为20～100μm。

在另一优选例中，所述活细胞选自下述细胞的一种或者多种：肝细胞、胰β细胞、心肌细胞、神经细胞、皮肤上皮细胞、软骨细胞、骨细胞、组织干细胞、ES细胞和iPS细胞；优选地，选自组织干细胞、软骨细胞、和骨细胞中的一种或者多种。