[发明专利]双生病毒复制抑制剂

说明书

本发明涉及复制抑制剂，其为抑制双生病毒的复制的药物，含有锌指蛋白，该锌指蛋白至少可与双生病毒的茎环区DNA的全长或其一部分特异性结合，且可抑制茎环结构的形成。

本申请是原案申请日为2011年6月6日、原案申请号201180030222.2(国际申请号为PCT/JP2011/062891)、发明名称为“双生病毒复制抑制剂”的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及对植物病毒有效的防除感染的手段。更具体地说，涉及针对植物病毒双生病毒的复制抑制剂以及对双生病毒感染具有抗性的植物等。

背景技术

锌指与螺旋-转角-螺旋基序、亮氨酸拉链基序同为DNA结合基序的一种，其是在氨基末端一侧具有2个半胱氨酸和在羧基末端一侧具有2个组氨酸，在这些残基上配位有锌(Zn)而成的立体结构。锌指对DNA具有非常强的结合力，因此有人利用该基序提出了与DNA牢固结合的人工DNA结合蛋白(以下在本说明书中有时称为“AZP”)，并报道了使用识别密码表(Nondegenerate Recognition Code Table(非简并识别密码表))设计的AZP，其可识别特定的碱基序列(日本特表2004-519211号公报；Biochemistry, 41, 7074-7081页,2002)。

一个锌指基序可识别3bp或4bp并结合，通过用肽接头连接锌指来调节希望特异性结合的碱基序列的长度。锌指基序的第4号的识别碱基序列是反义链，与下一个锌指基序的第1号的识别碱基序列重叠，因此，N个锌指基序识别3N+1 bp的碱基序列并结合(参照图1)。

有报道称，使用该AZP可实现对植物DNA病毒感染的防除(J. Virology, 79,2614-2619页, 2005)。该出版物中报道了在拟南芥中AZP防除植物DNA病毒甜菜严重曲顶病毒(Beet Severe Curly Top Virus)(BSCTV)感染的效果，该方法采用通过AZP来抑制病毒复制起始所需的复制蛋白(Rep)与复制起点上的Rep结合位点(同向重复序列)结合的手段，是基于复制起点的同向重复序列设计具有比Rep高的DNA结合能力的AZP来抑制病毒复制的方法。但是，在用AZP阻断Rep的同向重复序列的该方法中，复制起点具有病毒特有的碱基序列，因此，为了与各种植物病毒对应，存在必须使用分别不同的AZP的问题。从上述角度出发，人们希望提供用单一的AZP实现对多种植物病毒感染的防除效果的手段。

番茄黄化曲叶病是感染番茄的病毒病，通过烟粉虱传播的番茄黄化曲叶病毒(Tomato Yellow Leaf Curl Virus: TYLCV)感染而发病。番茄黄化曲叶病一旦发病，新叶自叶缘褪色、黄化，呈现曲叶症状，然后叶萎缩，植株全体矮化，生长停止。番茄黄化曲叶病在地中海沿岸、非洲、中近东、亚洲、中南美等地带来严重的灾害。TYLCV存在很多分离株，目前为止在日本国内报道的有TYLCV以色列株(急性型：长崎株和土佐株)以及TYLCV温和株(温和型：静冈株和爱知株)等。

TYLCV属于双生病毒科(Geminiviridae)，双生病毒是感染植物、具有1个或2个单链环状DNA的病毒的总称。双生病毒包括马铃薯黄色花叶病毒(Potato yellow mosaicvirus)和菜豆金色花叶病毒(Bean golden mosaic virus)等各种植物病毒，期待的是，如果可以提供以双生病毒中高度保守的碱基序列为靶标的病毒复制抑制手段，则不仅限于TYLCV感染，也可有效地防除多种植物病毒感染。关于具有双生病毒持续抗性的转化植物的制作方法，已知有国际公开WO2004/101798中公开的方法等，但与本发明的方法完全不同。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表2004-519211号公报

专利文献2：国际公开WO2004/101798

非专利文献