[发明专利]一种扩增特异性CAR-T细胞的培养方法

说明书

本发明公开了一种扩增特异性CAR‑T细胞的培养方法。本发明公开的扩增特异性CAR‑T细胞的培养方法，包括：1)向免疫细胞的培养体系中添加免疫细胞所识别的抗原，得到共培养体系；2)培养所述共培养体系，实现免疫细胞的扩增；免疫细胞为表达嵌合抗原受体的T细胞；共培养体系中免疫细胞与抗原的配比为10⁶个：1～100ng。实验证明，利用本发明的扩增特异性CAR‑T细胞的培养方法得到的CAR‑T细胞的阳性率可提高4‑6倍，并且该方法操作简便、高效、特异性强，实用性强。

技术领域

本发明涉及生物医学领域中，一种扩增特异性CAR-T细胞的培养方法。

背景技术

嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor，CAR)是基于T细胞受体的人工修饰融合蛋白，其由细胞外抗原识别结构域和细胞内信号传导结构域组成。嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)是将能识别某种肿瘤抗原的抗体的抗原结合部与CD3-ζ链或FcεRIγ的胞内部分在体外偶联为一个嵌合蛋白，通过基因转导的方法转染患者的T细胞，使其表达嵌合抗原受体(CAR)。嵌合抗原受体(CAR)由T细胞受体的胞外抗原结合区(scFv)、铰链区、中间的跨膜区及胞内信号区4个部分组成。目前，已有多种肿瘤抗原可用于胞外区识别，包括CD19、CD20、表皮生长因子受体(EGFR)和人类表皮生长因子受体2(HER-2)等。铰链区有CD8Hinge、CD28Hinge和较长的IgG1Fc或IgG4Fc等。中间的跨膜区有CD4、CD8和CD28等，将CAR结构锚定于T细胞膜上。细胞内结构域通常包含CD3ζ，CD28，4-1BB或OX40，用于增加T细胞活化。遗传修饰以表达CAR的T细胞可以直接识别CAR靶向的抗原，然后触发表达CAR特异性抗原的肿瘤细胞的T细胞活化，增殖，细胞因子分泌和细胞毒性。目前，CAR修饰的T细胞在治疗血液癌症，包括淋巴瘤，慢性淋巴细胞性白血病和急性淋巴细胞性白血病(ALL)方面取得了显著的成功。据报道，CD19靶向CAR-T细胞在所有患者中具有70％至90％的完全缓解率。可见，CAR-T细胞在肿瘤免疫治疗中的应用前景广阔，市场价值巨大。

CAR-T细胞治疗中，主要通过抗原-抗体识别模式对肿瘤细胞表面的特异分子进行识别，然后通过其胞内的信号传导进行激活、增殖并发挥细胞杀伤功能。因此，这种CAR特异性杀死肿瘤细胞机制，需要在CAR-T制备过程中，用CAR基因转导患者T细胞后，所获得的CAR-T特异性细胞越多越好，即在总T细胞中，转导了CAR基因的CAR-T细胞的比例(阳性率)越高越好，以达到更好的肿瘤细胞识别作用，激活靶细胞杀伤机制。