[发明专利]环二肽在制备慢性萎缩性胃炎药物中的应用

权利要求书

1.环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽、环脯-丙二肽和环脯-缬二肽中任意一种在治疗慢性萎缩性胃炎的药物中的应用。

2.环脯-丝二肽或环脯-天冬酰胺二肽在治疗慢性萎缩性胃炎的药物中的应用。

3.一种由美洲大蠊分离提取制备环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽、环脯-缬二肽和环脯-丙二肽的方法：

步骤1：将美洲大蠊粗粉经乙醇浸提后浓缩得浸膏；

步骤2：将上述浸膏上大孔树脂柱层析，用水洗脱，将洗脱液浓缩得水部位样品；

步骤3：取水部位样品经MCI柱层析，以水洗脱得到组分A；将组分A分为含较多氨基酸的A1组分和含较少氨基酸的A2组分；

步骤4：将A2组分经过LC-MS液质联用分离检测，得到化合物环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-丙二肽、环脯-缬二肽、环脯-异亮二肽、环脯-亮二肽。

4.根据权利要求3所述的环二肽的制备方法，其中，

步骤2中的大孔树脂柱为HP-20大孔树脂柱；

步骤3中的MCI柱的填料类型为MCI GEL CHP20P。

5.根据权利要求3所述的环二肽的制备方法，其中，

步骤1中，将美洲大蠊粗粉经乙醇浸提后减压浓缩得浸膏；

步骤2中，将所述浸膏旋干乙醇，用去离子水溶解后上大孔树脂柱层析柱；

步骤2中，将洗脱液浓缩再冷冻干燥得水部位样品；

步骤3中，结合TLC检测，通过茚三酮作为显色剂，根据TLC斑点个数将组分A区分为含氨基酸较多的A1组分和含氨基酸较少的A2组分；其中将TLC斑点数目小于等于5个的组分A作为A2组分，而其余的组分A为A1组分；优选地，将TLC斑点数目小于等于3个的组分A作为A2组分，而其余的组分A为A1组分。

6.根据权利要求5所述的环二肽的制备方法，其中，步骤3中，TLC检测的展开剂为正丁醇:冰醋酸:水＝4:1:1。

7.根据权利要求3所述的环二肽的制备方法，其中，步骤4中，

所述LC液相色谱条件采用的色谱柱选自：Capcell Pak C₁₈MGll，Boston Luna CloneC₁₈，Diamonsil C₁₈，Boston Luna Clone；优选地，所述LC液相色谱条件采用的色谱柱为Boston Luna Clone；

所述LC液相色谱条件中流动相采用流动相A和流动相B；

所述流动相A为0.06-0.3％甲酸水溶液或0.06-0.3％磷酸水溶液；优选地，所述流动相A为0.06-0.1％的甲酸水溶液；

所述流动相B为乙腈或醇类溶剂；优选地，所述流动相B为甲醇。

8.根据权利要求7所述的环二肽的制备方法，其中，步骤4中，所述LC液相色谱条件采用等度或梯度洗脱的方式；优选地，所述LC液相色谱条件采用梯度洗脱的方式，其中，所述梯度洗脱时所述流动相A与所述流动相B的体积比为90:10～5:95。

9.一种由美洲大蠊经提取分离同时制备环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽、环脯-缬二肽和环脯-丙二肽的方法：

步骤1：将美洲大蠊粗粉经乙醇浸提后减压浓缩得浸膏；

步骤2：将所述浸膏旋干乙醇，用去离子水溶解后上大孔树脂柱层析柱，用水洗脱，将洗脱液浓缩再冷冻干燥得水部位样品；

步骤3：取水部位样品经MCI柱层析，以水洗脱得到组分A；通过茚三酮作为显色剂，结合TLC检测将组分A分为含氨基酸较多的部分A1组分和含氨基酸较少的A2组分；其中，将TLC斑点数目小于等于3个的组分A作为A2组分，而其余的为A1组分其中，TLC检测的展开剂为正丁醇:冰醋酸:水＝4:1:1；

步骤4：将A2组分经过LC-MS分离检测分别得到化合物环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽、环脯-丙二肽和环脯-缬二肽。

10.根据权利要求3或9所述的环二肽的制备方法，其中，步骤4中，

LC液相色谱条件为：

色谱柱：Boston Luna Clone；

流动相采用表A的梯度洗脱程序；

其中，流动相A：0.1％甲酸水溶液，流动相B：乙腈

表A

其中，环脯-丝二肽保留时间为6.17±0.02min、环脯-天冬酰胺二肽保留时间为8.25±0.02min、环脯-丙二肽保留时间为10.38±0.02min、环脯-缬二肽保留时间为20.23±0.02min、环脯-异亮二肽保留时间为25.58±0.02min、环脯-亮二肽保留时间为27.38±0.02min。