[发明专利]小鼠抗人Desmin单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株

说明书

一种小鼠抗人Desmin单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。所述的分泌Desmin单克隆抗体的杂交瘤细胞株克隆号为TSG11，保藏编号为：CGMCC No. 12693。本发明还提供了所述杂交瘤细胞株TSG11产生的单克隆抗体。该抗体包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:9，轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:10。该抗体可用于科研或临床免疫组化检测Desmin表达。

技术领域

本发明涉及以原核表达的Desmin蛋白免疫小鼠获得的分泌Desmin单克隆抗体的杂交瘤细胞株TSG11，属于生物工程技术领域。

背景技术

Desmin（结蛋白）最初发现于1977年，是一种分子量50-55kD的中间丝蛋白，定位于胞浆；在平滑肌、骨骼肌和心肌细胞中表达，胚胎和成人横纹肌或平滑肌及其肿瘤均可表达，为肌源性分化的一个很好的标记物。子宫、皮肤、胃肠道及其他部位的平滑肌多呈阳性表达。

Desmin是一种重要的细胞骨架蛋白，在维持细胞内结构和胞外基质联结中起重要作用。近年来，细胞骨架蛋白在恶性肿瘤的发生和侵袭中起到的作用逐渐受到重视，骨架蛋白在各种恶性肿瘤中的研究与逐渐成为热点。Desmin对肌细胞的特异性使之成为有效识别源于平滑肌和横纹肌细胞的肉瘤，如平滑肌肉瘤和横纹肌肉瘤。Desmin主要用于子宫、皮肤和胃肠道平滑肌肿瘤、横纹肌肿瘤和肌上皮肿瘤的诊断和鉴别诊断。

目前，国内外已经获得了多种抗Desmin的单克隆抗体，但一直以来都需要表达量更多，亲和性更好，具有更多优良特性的单克隆抗体。获得活性高的抗Desmin的单克隆抗体对于临床诊断和科学研究具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种高亲和性的、可用于科研或临床免疫组化检测Desmin表达的小鼠抗人Desmin单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

（1）根据Desmin的基因序列（NM_001927）的编码框，设计一对特异引物，TrizolReagent试剂提取人脂肪组织总RNA，将总RNA逆转录成cDNA并以cDNA为模板PCR扩增Desmin基因，构建重组表达载体PET28a- Desmin，转化大肠杆菌BL21感受态，IPTG诱导蛋白表达并亲和纯化蛋白作为抗原。

（2）采用经典的细胞融合技术制备Desmin单克隆抗体。亲和层析纯化抗体蛋白，SDS-PAGE测定抗体纯度，直接ELISA 法测定纯化抗体的滴度。

（3）通过免疫组织化学分析Desmin单克隆抗体染色人乳腺癌石蜡切片。

（4）根据抗体基因的恒定区序列合成特异性引物，PCR扩增单克隆抗体Desmin重链可变区和轻链可变区，回收目的片段，克隆到pGEM-T载体中，转化大肠杆菌TGl细胞后筛选阳性克隆，抽提质粒后测序确定了单克隆抗体Desmin的重链和轻链可变区序列。

本发明提供的以原核表达的Desmin蛋白为抗原、免疫小鼠获得的分泌Desmin单克隆抗体的杂交瘤细胞株，名称为TSG11，分类命名为小鼠抗人Desmin杂交瘤细胞系，该细胞株已于2016年08月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所），保藏编号为CGMCC No. 12693。

本发明还提供了所述杂交瘤细胞株TSG11，CGMCC No. 12693产生的单克隆抗体。该抗体包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:9，轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:10。

本发明的优点和有益效果：